本試劑盒只能用于科學(xué)研究,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
小鼠（Mouse）纖連蛋白（FN）ELISA檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)
先包被纖連蛋白（FN）抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品,、
HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB
在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的
,。顏色的深淺和樣品中的纖連蛋白（FN）呈正相關(guān)。用酶標儀
在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度,。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞
刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地
分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘
取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于
-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20 分鐘,。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解
后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。
3. 濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5 倍,，zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實際濃度,。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作,。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻,。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
樣本稀釋液6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、7.5,、15,、30、60,、120 ng/mL
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋,，即1 份的20×洗滌緩
沖液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min 后甩盡
孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干,，如此洗板5 次,。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min,，洗板5 次,。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封
袋密封放回4℃,。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL,；空白孔不
加。
4. 除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴
鍋或恒溫箱溫育60min,。
5. 棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去
洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機洗板）,。
6. 每孔加入底物A,、B 各50μL，37℃避光孵育15min,。7. 每孔加入終止液50μL,，15min 內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的
OD 值,。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線：在Excel 工作表中,，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)
OD 值作縱坐標,，繪制出標準品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣
本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,，大于等于
0.9900,。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
4. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。
6. 有效期：6 個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗,，否則所
產(chǎn)生的一切后果,，由實驗者承擔，本公司概不負責,。
2. 嚴格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者
承擔,。