人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA 試劑盒的操作步驟

背景[1-3]

人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒用于測定血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中胃蛋白酶原A(PG-A)的含量。

人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（elisa）的原理,。往預(yù)先包被人胃蛋白酶原A(PG-A)捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的人胃蛋白酶原A(PG-A)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，計算樣品濃度。

人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒

標(biāo)本要求

1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。

2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次離心,。

3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。

操作步驟

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。

4.除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。