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研域(上海)化學試劑有限公司

細胞因子溶解操作方法及注意事項

時間:2021-12-23閱讀:3256

上海研域生物所供應的PeproTech細胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA,、HAS或蔗糖等),,并且通常以少量的鹽來進行凍干處理,,因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內,形成很薄或不可見的蛋白層,。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,,務必在開蓋前先離心,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時能否見到白色沉淀均屬正?,F(xiàn)象),。


1、離心:高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘,。


2、溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說明書要求進行選擇)溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL,,如10ug的產(chǎn)品,,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。


細胞因子


溶解時不可振蕩,,避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活,,可加入適當?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,待細胞因子*溶解后使用,。溶劑的選擇:


1,、要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,務必不可用鹽溶液,,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出,;


2,、要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,,請依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度,。


3,、分裝和貯存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根據(jù)自己的實驗需要進一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640,、DMEM或PBS等溶液,,其中含有5-10%的FCS (小牛或胎牛血清)或0.5 %的BSA(牛血清白蛋白)來穩(wěn)定蛋白,。工作液在4℃可保存1周,,如需長期保存,,則需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-80℃)。分裝時每管中工作液的體積是一次實驗的用量,,以實現(xiàn)每次實驗用完一只工作液,,避免反復凍融引起蛋白活性的降低。 

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