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上海研域生物所供應(yīng)的PeproTech細(xì)胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA、HAS或蔗糖等),,并且通常以少量的鹽來進(jìn)行凍干處理,,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi),,形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,,務(wù)必在開蓋前先離心,,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時能否見到白色沉淀均屬正?,F(xiàn)象)。
1,、離心:高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
2,、溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇)溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL,,如10ug的產(chǎn)品,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解),。
溶解時不可振蕩,,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,,待細(xì)胞因子*溶解后使用,。溶劑的選擇:
1、要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,,務(wù)必不可用鹽溶液,,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;
2,、要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,,請依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度,。
3,、分裝和貯存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640,、DMEM或PBS等溶液,,其中含有5-10%的FCS (小牛或胎牛血清)或0.5 %的BSA(牛血清白蛋白)來穩(wěn)定蛋白,。工作液在4℃可保存1周,,如需長期保存,則需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-80℃),。分裝時每管中工作液的體積是一次實(shí)驗(yàn)的用量,,以實(shí)現(xiàn)每次實(shí)驗(yàn)用完一只工作液,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低,。
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