任何場景細節(jié)決定成敗,，這對于實驗室科研工作者來說也是如此,。在ELISA試劑盒實驗中的各項操作細節(jié)有很多,，如盡量少用排槍、勤換槍頭,，加樣時由低濃度向高濃度加,，因為這樣可以減少跳孔的幾率。而整個實驗的尤其關鍵就是結(jié)果的處理方法了,，那么在在今天的技術文章中,，上海研域生物為您帶來的是ELISA試劑盒檢測結(jié)果分析方法。

1：ELISA實驗中樣品都要做復孔或三孔,，然后計算每個濃度標準品的平均OD值,，復孔的變異系數(shù)應該小于20%。

2：平均OD值減去空白孔的OD值,。

3：制作標準曲線,。

以減去本底后的OD值為X軸，標準品的濃度為Y軸,，利用作圖軟件得出一個合適的計算方法,。建議使用合適的軟件來作圖，比如CurveExpert 1.4,。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線,、半對數(shù)、對數(shù),、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條zui合適的方程,。要想檢驗某條曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標準品的濃度作為未知數(shù),，將對應的OD值帶入該方程,，計算出標準品的濃度，得到的結(jié)果應該與實際濃度很接近(+/-10%),。選擇擬合度zui高的那條曲線,。

ELISA試劑盒實驗如果出現(xiàn)標準曲線的線性不好，或平行性不好(雙孔對照孔的OD值差別很大),，或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標板孔間相互污染,、洗板后未能盡快進行下一步操作,、添加樣品或其它試劑時操作的方法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發(fā),、酶標板孔問加入的試劑量不同,，相對應的解決辦法是加樣時請小心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請小心,，勿將洗滌液濺人另一微孔中,、在洗板后及時進行下一步操作,、添加試劑時請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi),，吸取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭,、確認孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標板密封好,、使用已校正過的微量加樣器,，如將一次加入液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下,，以保證加入液體體積的一致性,。