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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>實驗時ELISA試劑盒至關(guān)重要的過程
ELISA試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的試驗確診方法。盡管ELISA試劑盒的操作過程看似簡單,,但沒做到位的話就會影響試驗的作用。所以ELISA試劑盒試驗時至關(guān)重要的過程有:
di一,、重要的洗刷:
不充分的洗刷會導(dǎo)致差異和高布景,,從而帶來不抱負的試驗結(jié)果。假如未結(jié)合的材料殘留在微孔板中,,那么它會添加布景噪音,。有必要的話,可添加洗刷液中的鹽濃度,,這會阻止非特異結(jié)合反響,。假如布景過高,置疑洗刷不行時,,能夠測驗添加洗刷次數(shù),。
第二、關(guān)鍵的關(guān)閉:
關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點,。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的時機,。假如布景過高,置疑關(guān)閉不充分,,那么能夠測驗運用更高濃度的關(guān)閉液,,或適當(dāng)延伸關(guān)閉時間。
現(xiàn)在主要有兩種類型的關(guān)閉液:蛋白和非離子型去污劑,。ELISA試劑盒運用的類型須取決于多個因素,,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原,、抗體和檢測試劑,。好的關(guān)閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原,、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用,。
第三、抗體濃度須優(yōu)化:
假如試劑稍有不同,,則或許需求優(yōu)化抗體的量,。非特異的抗體結(jié)合會添加布景。為了防止這一點,,切勿運用過多的一抗或二抗。
第四、檢測試劑要適量:
切勿運用過多的檢測試劑,。假如濃度過高,,ELISA試劑盒或許未正確稀釋,則會導(dǎo)致高布景,。也不要顯色過度,,如有必要,優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液,。
只要確保每一步操作都做到位,,才會出現(xiàn)的試驗結(jié)果。所以ELISA試驗的每一步都很重要,,不能夠漫不經(jīng)心,。
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