特殊細胞系培養(yǎng)基

時間：2011-4-12閱讀：1737

培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長,。總之,，MEM做粘附細胞培養(yǎng),、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)AIM V（12005）培養(yǎng)基（SFM）,。

L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎,？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？
L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的,。脫掉氨基后,，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,，但是確切的降解率一直沒有zui終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,，而氨對于一些細胞具有毒性,。

GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I,？這個二肽有多穩(wěn)定,？
GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,，釋放L-谷氨酰胺供利用,。

GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘,，GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解,，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎*降解,。

什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅,？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為,，堿性時為紫色,。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用,，（特別是雌激素）,。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細胞,，尤其是哺乳類細胞時,，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,，一些研究人員在做流式細胞檢測時,，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色,，酸性時為,，堿性時為紫色。研究表明,，酚紅可以模擬固醇類激素的作用,，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應(yīng),，培養(yǎng)細胞,，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基,。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時,，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基,。

如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞？
用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200～2000個/毫升,，在0.1毫升的細胞懸液中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液,。輕輕混勻,，數(shù)分鐘后，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞,?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞,。

如何消除組織培養(yǎng)的污染,？
當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染,。首先,，確定污染物是細菌、真菌,、支原體或酵母,，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,，檢查HEPA過濾器,。

高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而,，做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟,。

1.	在無抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度,。
2.	分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,，或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),，把選擇抗生素加入到每一個孔中,。例如，兩性霉素B推薦下列濃度,，0.25,，0.50，1.0,，2.0,，4.0,8.0 mg/ml。
3.	每天觀測細胞毒性指標,，如脫落,，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓,。
4.	確定抗生素毒性水平后,，使用低于毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2～3代,。
5.	在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。
6.	重復(fù)步驟4,。
7.	在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4～6代,，確定污染是否以已被消除。

培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么,？
丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是,，如果沒有葡萄糖的話,，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

Hank's 平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用,，不需要CO2培養(yǎng)箱,。原因是什么？Hank's 平衡鹽溶液（HBS）和Earle's平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別,？
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles （2.2g/L）中比在Hanks （0.35g/L）中高,。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值,。Eagles液在空氣水平的CO2 中,，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸,。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,，需要用Eagles液，,。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,，用Hanks液就可以了。

二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎,？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么,？
二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,，以便保持抑制胰蛋白酶的活性,。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞,，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子,。

我試用SF900 II時，細胞生長良好,，但是我的蛋白產(chǎn)物不如使用Graces 液和10%胎牛血清時效果好,。
如果目的蛋白是一個后期蛋白，它將與蛋白酶一起表達，這些蛋白酶將會作用于目的蛋白,。在加有血清的培養(yǎng)基中，這些蛋白酶將作用到血清中的蛋白,，從而使目的蛋白產(chǎn)品保持完好,。在無血清配方中，蛋白酶作用的*底物是你的目的蛋白,。為了避免這一問題,，加入一些蛋白酶抑制劑或加入少量的血清（少于1％），讓血清給蛋白酶提供作用底物,。

20°C下配制的緩沖液,，在較高或較低的溫度下PH值會改變嗎？
對于普通使用的緩沖液,，PH值隨溫度變化而變化,。

下表列出溫度改變10℃時，PH值的變化情況：

例如 20℃下配制PH7.4 Tris緩沖液,40℃時PH值為 7.4-（2x0.310）＝6.78

緩沖系統(tǒng) pKa/20℃ [ Delta]pKa/10℃

Mes 6.15 -0.110
Ada 6.60 -0.110
Pipes 6.80 -0.085
Aces 6.90 -0.200
Bes 7.15 -0.160
Mops 7.20 -0.013
Tes 7.50 -0.200
Hepes 7.55 -0.140
Tricine 8.15 -0.210
Tris 8.30 -0.310
Bicine 8.35 -0.180
Glycylglycine 8.40 -0.280

室溫下（25?）配制的Tris-HCl溶液,，在37℃使用時PH值是多少,？

緩沖液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃,，25℃,，37℃時，不同的PH值,。

4°C	25°C	37°C
8.1	7.5	7.2
8.2	7.6	7.3
8.3	7.7	7.4
8.4	7.8	7.5
8.5	7.9	7.6
8.6	8.0	7.7
8.7	8.1	7.8
8.8	8.2	7.9
8.9	8.3	8.0
9.0	8.4	8.1
9.1	8.5	8.2
9.2	8.6	8.3
9.3	8.7	8.4
9.4	8.8	8.5

室溫下（25?）配制的Tris-HCl溶液,，在37℃使用時PH值是多少？

緩沖液的PH值隨溫度變化而變化,。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃,，25℃，37℃時,，不同的PH值,。

昆蟲細胞培養(yǎng)的zui適PH值和滲透壓是多少？
生長培養(yǎng)基的PH值對細胞的增殖和病毒或重組蛋白的生產(chǎn)均會產(chǎn)生影響,。對于大部分鱗翅類昆蟲細胞系,，在PH值 6.0～6.4范圍的大部分應(yīng)用效果良好。培養(yǎng)鱗翅類昆蟲細胞系時,，培養(yǎng)基的zui適滲透壓是345-380mOsm/kg.,。為保證可靠和持久的細胞培養(yǎng)方式，減少技術(shù)問題,，保持PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內(nèi),。

胰酶消化一個T25瓶的sf9細胞：

1.	去除培養(yǎng)基。
2.	用2ml 1xPBS（足以覆蓋細胞表面）洗滌細胞，去除PBS,。
3.	加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細胞表面）,。
4.	37 ℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動,。
5.	向細胞中加入2ml 細胞培養(yǎng)液,，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁,，移入同一錐形管中,。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性。）
6.	離心（1100rpm）沉淀細胞,。去除培養(yǎng)基,。

研域（上海）化學試劑有限公司

研域（上海）化學試劑有限公司

特殊細胞系培養(yǎng)基

會員登錄

收藏該商鋪

提示