將有機官能團通過化學(xué)反應(yīng)共價鍵合到硅膠表面的游離羥基上而形成的固定相稱為化學(xué)鍵合相,。這類固定相的突出特點是耐溶劑沖洗，并且可以通過改變鍵合相有機官能團的類型來改變分離的選擇性,。
1.鍵合相的性質(zhì)
   目前,，化學(xué)鍵合相廣泛采用微粒多孔硅膠為基體，用烷烴二甲基氯硅烷或烷氧基硅烷與硅膠表面的游離硅醇基反應(yīng),，形成Si-O-Si-C鍵形的單分子膜而制得,。硅膠表面的硅醇基密度約為5個/nm2，由于空間位阻效應(yīng)（不可能將較大的有機官能團鍵合到全部硅醇基上）和其它因素的影響,，使得大約有40~50%的硅醇基未反應(yīng),。
   殘余的硅醇基對鍵合相的性能有很大影響，特別是對非性鍵合相,，它可以減小鍵合相表面的疏水性,，對性溶質(zhì)（特別是堿性化合物）產(chǎn)生次級化學(xué)吸附，從而使保留機制復(fù)雜化（使溶質(zhì)在兩相間的平衡速度減慢，降低了鍵合相填料的穩(wěn)定性,。結(jié)果使堿性組分的峰形拖尾）,。為盡量減少殘余硅醇基，一般在鍵合反應(yīng)后,，要用*基氯硅烷（TMCS）等進行鈍化處理,，稱封端（或稱封尾、封頂,，end-capping）,，以提高鍵合相的穩(wěn)定性。另一方面,，也有些ODS填料是不封尾的,，以使其與水系流動相有更好的"濕潤"性能。
   由于不同生產(chǎn)廠家所用的硅膠,、硅烷化試劑和反應(yīng)條件不同,，因此具有相同鍵合基團的鍵合相，其表面有機官能團的鍵合量往往差別很大,，使其產(chǎn)品性能有很大的不同,。鍵合相的鍵合量常用含碳量（C%）來表示，也可以用覆蓋度來表示,。所謂覆蓋度是指參與反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例,。
   pH值對以硅膠為基質(zhì)的鍵合相的穩(wěn)定性有很大的影響，一般來說,，硅膠鍵合相應(yīng)在pH=2~8的介質(zhì)中使用,。　
2.鍵合相的種類
   化學(xué)鍵合相按鍵合官能團的性分為性和非性鍵合相兩種,。
   常用的性鍵合相主要有氰基（-CN）,、氨基（-NH2）和二醇基（DIOL）鍵合相。性鍵合相常用作正相色譜,，混合物在性鍵合相上的分離主要是基于性鍵合基團與溶質(zhì)分子間的氫鍵作用,，性強的組分保留值較大。性鍵合相有時也可作反相色譜的固定相,。
   常用的非性鍵合相主要有各種烷基（C1~C18）和苯基,、苯甲基等，以C18應(yīng)用zui廣,。非性鍵合相的烷基鏈長對樣品容量,、溶質(zhì)的保留值和分離選擇性都有影響，一般來說,，樣品容量隨烷基鏈長增加而增大,，且長鏈烷基可使溶質(zhì)的保留值增大,，并常常可改善分離的選擇性,；但短鏈烷基鍵合相具有較高的覆蓋度,，分離性化合物時可得到對稱性較好的色譜峰。苯基鍵合相與短鏈烷基鍵合相的性質(zhì)相似,。
   另外C18柱穩(wěn)定性較高,，這是由于長的烷基鏈保護了硅膠基質(zhì)的緣故，但C18基團空間體積較大,，使有效孔徑變小,，分離大分子化合物時柱效較低。
3.固定相的選擇
   分離中等性和性較強的化合物可選擇性鍵合相,。氰基鍵合相對雙鍵異構(gòu)體或含雙鍵數(shù)不等的環(huán)狀化合物的分離有較好的選擇性,。氨基鍵合相具有較強的氫鍵結(jié)合能力，對某些多官能團化合物如甾體,、強心甙等有較好的分離能力,；氨基鍵合相上的氨基能與糖類分子中的羥基產(chǎn)生選擇性相互作用，故被廣泛用于糖類的分析,，但它不能用于分離羰基化合物，如甾酮,、還原糖等,，因為它們之間會發(fā)生反應(yīng)生成Schiff 堿。二醇基鍵合相適用于分離有機酸,、甾體和蛋白質(zhì),。
   分離非性和性較弱的化合物可選擇非性鍵合相。利用特殊的反相色譜技術(shù),，例如反相離子抑制技術(shù)和反相離子對色譜法等,，非性鍵合相也可用于分離離子型或可離子化的化合物。ODS（octadecyl silane）是應(yīng)用的非性鍵合相,，它對各種類型的化合物都有很強的適應(yīng)能力,。短鏈烷基鍵合相能用于性化合物的分離，而苯基鍵合相適用于分離芳香化合物,。
   另外,，美國藥典對色譜法規(guī)定較嚴，它規(guī)定了柱的長度,，填料的種類和粒度,，填料分類也較詳細，這樣使色譜圖易于重現(xiàn),；而中國藥典僅規(guī)定填料種類,，未規(guī)定柱的長度和粒度,，這使檢驗人員難于重現(xiàn)實驗，在某些情況下還浪費時間和試劑,。