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薄層色譜法,,又簡(jiǎn)寫(xiě)為T(mén)LC,,常用于中藥成方制劑中有效成分的定性鑒別,。由于該方法鑒別專(zhuān)屬性強(qiáng),,使用設(shè)備簡(jiǎn)單,易于操作,,故應(yīng)用廣泛,,在目前的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)定性鑒別中(如中國(guó)藥典和食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)),已大大地超過(guò)了顯微鑒別,、理化鑒別和光譜鑒別,。
筆者在zui近的醫(yī)院制劑申報(bào)過(guò)程中,對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定,,使用了大量的薄層譜法,,積累了一定的工作經(jīng)驗(yàn)。下面,,對(duì)薄層色譜法在中藥復(fù)方制劑中的應(yīng)用,,提出自己的一些思路。
一,、醫(yī)院制劑由于其自身的特殊性,,如只能在本院銷(xiāo)售,生產(chǎn)和檢驗(yàn)設(shè)備簡(jiǎn)陋,,生產(chǎn)量小,,劑型和品種相對(duì)較多,,生產(chǎn)中常以水煎煮為主。故在選擇處方中的薄層定性藥材時(shí),,應(yīng)以選擇水溶性成分為先,。如芍藥苷、梔子苷,、黃芪甲苷,、龍膽苦苷、人參皂苷等苷類(lèi)或綠原酸,、阿魏酸等易溶于水的有機(jī)酸類(lèi)成分。
二,、仔細(xì)分析處方,。選擇方中薄層定性的藥材,應(yīng)先選取以粉碎入藥的藥材,。因?yàn)檫@部分藥材中的有效成分一般沒(méi)被破壞,,特別是一些含有揮發(fā)性成分的藥材,如薄荷,、香附,、荊芥等,在薄層層析中以藥材作為對(duì)照品,,很容易鑒別出來(lái),。
三、對(duì)處方中含有多糖類(lèi)或淀粉質(zhì)較多的藥材,,如麥冬,、北沙參、黨參等,,可采取先酸解后用有機(jī)溶劑提取的方法,。經(jīng)這樣處理后,薄層層析斑點(diǎn)一般都比較清晰,,藥檢所復(fù)核時(shí)往往容易通過(guò),。
四、在使用展開(kāi)劑時(shí),,在同等條件下,,應(yīng)選擇無(wú)毒或毒性較小的有機(jī)溶劑。如選用環(huán)己烷而不選用正己烷,,選用甲苯而不選用苯,。以減少有機(jī)溶劑毒性對(duì)人體的侵害。
五,、對(duì)樣品的取樣量不宜太大,。如果取樣量太大,,點(diǎn)樣時(shí)往往因樣品的濃度太高而造成點(diǎn)樣困難,展開(kāi)時(shí)斑點(diǎn)又不易分離而使薄層圖譜不清晰,。
六,、對(duì)中藥復(fù)方制劑的液體劑型,提取分離方法應(yīng)溶劑法,,用適宜的有機(jī)溶劑提取,。如是提取水溶性成分,應(yīng)考慮對(duì)樣品進(jìn)行脫脂處理,。對(duì)酒劑,、酊劑或搽劑中含有的樣品,應(yīng)先在水浴上蒸去后再作下一步的處理,。如液體劑型不宜用有機(jī)溶劑提取,,也可采用先將藥液置水浴上蒸干(或加入適量硅藻土分散),再用有機(jī)溶劑提取的方法,。
七,、對(duì)中藥復(fù)方制劑的固體劑型,提取分離方法可選用超聲提取法,、回流提取法或溶劑提取法(應(yīng)先將樣品加定量水溶解)等,。超聲提取方法簡(jiǎn)單,所需時(shí)間短,,目前使用較多,,應(yīng),但在使用過(guò)程中應(yīng)注意一個(gè)問(wèn)題,,如提取時(shí)使用的有機(jī)溶劑是,,超聲處理時(shí)間應(yīng)控制在10~20min以?xún)?nèi),超聲時(shí)容器不能密閉太緊,,以免瓶塞沖出或全部揮發(fā),,特別是在氣溫較高的夏天,尤其要注意,。
八,、對(duì)中藥復(fù)方制劑的外用劑型,如軟膏劑,、黑膏藥,、貼膏一類(lèi),在樣品處理時(shí),,應(yīng)首先考慮去掉賦形劑后再對(duì)樣品進(jìn)行處理,。如用凡士林制成的軟膏,可用有機(jī)溶劑除去凡士林,。
九,、樣品經(jīng)薄層展開(kāi)后,,觀察層析情況,筆者認(rèn)為應(yīng)多選擇在日光下觀察為主,。原因?yàn)榇蠖鄶?shù)醫(yī)院制劑室未建立暗室,,在紫外光燈下拍照有困難。
十,、對(duì)樣品中某些成分的提取分離,,可先采取相類(lèi)似的方法,然后再選用不同的定容溶液和展開(kāi)劑,,即可達(dá)到目的,。如同時(shí)提取某些皂苷類(lèi)、苷類(lèi),、有機(jī)酸類(lèi)等,。
十一、在中藥復(fù)方制劑中,,往往藥味較多,化學(xué)成分較為復(fù)雜,,給單一成分的分離造成一定困難,。為了達(dá)到分離的目的,在具體操作中,,可以考慮使用高速離心,,柱層析、氧化鎂凈化,、水或氨試液洗滌等多種操作方法,。但在使用這些方法時(shí),必須注意不能把應(yīng)提取的有效成分棄掉了,。
十二,、在用碘蒸氣或氨蒸氣對(duì)薄層板顯時(shí),所加的量不宜過(guò)多,,使用的容器必須密閉,,操作人不得離開(kāi),必須等到薄層斑點(diǎn)顯度適宜時(shí),,才可取出,。
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