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1,、怎樣提高點(diǎn)樣效率,? 點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來(lái)源。 定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣,;微量
注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣,。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀荨⑷芤夯嘏垃F(xiàn)象的影響較大,。為避免不同定量毛細(xì)管理體制的
占樣誤差,,建議一塊薄層板上用同一只定量毛細(xì)管,。但應(yīng)注意更換樣品時(shí),應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同性溶課劑清洗干凈
,。在制備樣品時(shí),,溶樣溶劑黏度不能過(guò)高,以便于點(diǎn)樣,;溶劑沸點(diǎn)過(guò)低則進(jìn)樣體積易變,,過(guò)高則會(huì)改變展開(kāi)劑組成;對(duì)樣品溶解
度過(guò)高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象,,常用的溶劑為甲醇,、乙醇、丙酮,。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距離1-2cm底邊距離
1.5cm;HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm底邊距1cm. 2,、展開(kāi)劑的選擇 TLC與HPLC相比,一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選
擇具有更大的靈活性,,流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1-0.7之間并達(dá)到較好的分離,,與此對(duì)應(yīng)的是流動(dòng)相
要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成。流動(dòng)相強(qiáng)度越大,,溶質(zhì)Rf值越大,,但很可能降低分離能力;另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物,、根
據(jù)相似相溶原理,,要使用多元溶劑體系。一般展開(kāi)劑體系選擇如下:根據(jù)分離樣品性質(zhì),、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系
,,通過(guò)調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值,適合的Rf值找到后,,再尋求性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個(gè),,以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成
一個(gè)三角形,則可看到:三角形頂點(diǎn)是二元體系,,邊是三元體系,,三角形內(nèi)是四元體系,并且性一致,,可根據(jù)幾何原理得出任
一點(diǎn)組成,,這種方法較為直觀,也較簡(jiǎn)單,。 理想的顯色希望靈敏度高,,斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好,斑點(diǎn)的
大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比,,在樣品組成并不已知的情況下,,通用顯色方法顯得尤為重要. 通用顯色方法主要有:
1、紫外照射法:方便,、不破壞樣品,; 2、碘蒸氣法:通用性強(qiáng),,與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用; 3,、熒光試劑:制
造熒光背景,,使原來(lái)紫外下無(wú)熒光物質(zhì)被鑒別,有熒光物質(zhì)更明顯,; 展開(kāi)劑選擇的大概原則 選擇展開(kāi)劑一般要用混合溶劑
:一般要有一種對(duì)所要展開(kāi)樣品溶解度較大的溶劑,,視樣品的性,再選用相應(yīng)的體系
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