SEC（Size Exclusion Chromatography）是一種液相色譜分離技術，也稱為凝膠過濾色譜。SEC能夠將多聚體物質根據(jù)大小和形狀進行分離,，所以廣泛應用于生化分析和工業(yè)制藥中,。SEC重要的組成部分就是色譜柱，因此我們需要了解SEC色譜柱設計原理,。
SEC色譜柱的主要部件是填料,，填料的選擇要根據(jù)樣品的特點來定。通常采用的即是硅膠凝膠或者瓊脂糖凝膠,，這些凝膠是一類具有交聯(lián)結構的高分子材料,，可提供一定的孔隙用于分離、定量分析及純化目標大分子化合物,。使用小分子化合物做指示劑,，看其在滲透性強的分子篩孔道和顆粒之間晃動情況，再與相應的臨界分子量對照確定待測物質的分子大小,。故SEC的關鍵在于色譜柱的分離效率和分辨率,。
首先，填料粒徑在設計時很重要,。柱子內儲存不同尺寸的微粒需要合適的粒徑大小區(qū)分開，因此具有不同孔徑長度的填料列裝方式在SEC色譜柱中被廣泛使用,。這樣柱內就可以形成一個分子篩效應,，使得純度更高。
其次,，則是填料的類型,。如前述，硅膠凝膠和瓊脂糖凝膠是兩種常用的填料,，硅膠適合聚丙烯酸,、聚乙烯醇、聚硫化橡膠等水溶性標樣,，而瓊脂糖凝膠則針對肽類,、核酸及寡聚糖等生物大分子，也可以根據(jù)需要調節(jié)pH值以重定分離機理和選擇適當?shù)娜軇﹣磉M行操作,。
然后則是特殊的處理技巧。在一些情況下，可能會出現(xiàn)液相分離的情況導致低分子量多聚體大于高分子量多聚體地往下移動,，從而影響測試結果,。因此，在分析部分材料時,，需要注意樣本濃度和流速控制,，加入一些共軛劑來限制帶電粒子的積聚。
總之，SEC色譜柱設計需要考慮填料選型,、填料粒徑,、沉降速率、線速率,、柱子規(guī)格,、流速等一系列參數(shù)，才能提供符合實驗標準的分離試驗,。在應用中,，需要根據(jù)樣品類型和待檢測成分不同來選擇合適的色譜柱。
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