Question :

使用LCMS測定以不揮發(fā)性流動相條件測出的雜質(zhì)時,，是否還需要重新探討揮發(fā)性流動相條件？

Solution :

不需要,。如果使用Trap-free 2維LC/MS系統(tǒng)則可在線變更流動相,。

可在線實現(xiàn)不揮發(fā)性流動相和揮發(fā)性流動相之間的切換。
與Labsolutions聯(lián)合使用,，是非常便利的支持工具,。
只須將目標(biāo)雜質(zhì)導(dǎo)入MS，而無需擔(dān)心峰遺失,。

Trap-Free 2維LC/MS雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)的分析流程

使用支持工具創(chuàng)建時間程序和批處理表

只需輸入在一維UV色譜圖上的雜質(zhì)峰的保留時間,，就可編制的閥切換。同時創(chuàng)建用于獲取多個雜質(zhì)與各空白數(shù)據(jù)的批處理表,。

使用支持工具制作時間程序與批處理表

有力支持雜質(zhì)解析的軟件

利用作為LabSolutions附屬功能的數(shù)據(jù)瀏覽器,，比較樣品與空白的數(shù)據(jù)，可方便地確認(rèn)雜質(zhì)的質(zhì)譜圖,。      

數(shù)據(jù)瀏覽器上顯示樣品與空白數(shù)據(jù)的實例

⇒（相關(guān)信息）基于Trap-Free 2維LC/MS雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)的藥物雜質(zhì)分析

注意事項
1.本系統(tǒng)由LC單元,、質(zhì)譜儀,、及啟動套件構(gòu)成。
2.啟動套件包括軟件和一套必要的配管部件,。

基于Trap-Free 2維LC/MS雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)的藥物雜質(zhì)分析

    為了提高藥物的安全性,，需要解析藥物中所含雜質(zhì)有無遺傳毒性等嚴(yán)重毒性，這就要求進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析,。LC/MS可有效應(yīng)用于微量雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)解析,，但HPLC分析雜質(zhì)時，經(jīng)常以210nm等短波長檢測,，因此,，流動相多使用磷酸緩沖液。此時,，不能以此流動相將未知雜質(zhì)導(dǎo)入LC/MS,。有時即便緩沖液的pH*，但因一些雜質(zhì)的分離狀態(tài)發(fā)生變化,，而難以使用LC/MS進(jìn)行未知雜質(zhì)的解析,。

    圖1為阿托伐他汀鈣的雜質(zhì)分析，是將流動相緩沖液從日本藥典收錄的檸檬酸緩沖液 pH5.0（為不揮發(fā)性鹽,，不能導(dǎo)入LC/MS）變更為同一pH的醋酸緩沖液,，將有機(jī)溶劑從四氫呋喃/ 乙腈（1/1）混合液變?yōu)橐译鏁r的色譜圖?？芍鞒煞值南疵摃r間雖然沒有大的差異,，但雜質(zhì)的洗脫模式發(fā)生了較大變化。因此,，為了解析雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)解析,，需要以HPLC分析條件下的流動相，將目的雜質(zhì)導(dǎo)入LC/MS,。

    在此介紹應(yīng)用“Trap-free 2維LC/MS雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)”（圖2）進(jìn)行上述雜質(zhì)結(jié)構(gòu)解析的實例,。

圖1　 阿托伐他汀鈣の雜質(zhì)分析例

    在此系統(tǒng)的1維中，以通常的HPLC分析條件進(jìn)行分離,，將需要進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析的雜質(zhì)峰的峰頂附近導(dǎo)入捕集環(huán)路,。此環(huán)路對于2維的分離起到進(jìn)樣器的作用。2維起到分離1維的流動相成分和目的雜質(zhì),，以及導(dǎo)入至LC/MS的作用,。

    因此， 2維的分離條件幾乎不進(jìn)行單獨(dú)探討,，使用一般的基于0.1％甲酸/ 乙腈的梯度洗脫導(dǎo)入MS部分,。為了進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，MS使用可實施,、獲得的精密質(zhì)量數(shù)的LCMS-IT-TOF,。

圖2　Trap-free2維LC/MS雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)配置
［1維（紅色流路）在通常的分析條件下使用］

    圖3表示按日本藥典收錄的分離條件檢測的雜質(zhì)a（含約0.2％,，參照圖1）的2維的色譜圖。沒有進(jìn)行捕集濃縮,，將峰頂附近導(dǎo)入2維，去除了來自1維流動相的影響,，可將目的雜質(zhì)導(dǎo)入MS,。圖4表示對此雜質(zhì)獲得的MS譜圖。

    可同時進(jìn)行正負(fù)離子測定,，可測定質(zhì)量數(shù)信息,。

圖3　雜質(zhì)a的2維色譜圖

圖4　雜質(zhì)a的MS譜圖

    雜質(zhì)a的m/z 718的MS/MS譜圖結(jié)果如圖5所示。將本譜圖與主成分阿托伐他汀的MS/MS譜圖進(jìn)行比較,，推測雜質(zhì)a的結(jié)構(gòu)為圖6,。并且，對于更微量的雜質(zhì)b（約0.01％,，參照圖1）,，如圖7所示，能夠以出色的S/N比獲得正,、負(fù)極性的質(zhì)譜圖,。

圖5　雜質(zhì)a的MS/MS譜圖

圖6　雜質(zhì)a的推測結(jié)構(gòu)

圖7 雜質(zhì)b的MS譜圖