產(chǎn)品名稱：大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Rapid Detection kit for Escherichia coli O157:H7

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒基于環(huán)介導(dǎo)的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification,，LAMP）,，用于食品中大腸桿菌O157:H7 的快速檢測(cè)，可借助顯色指示劑直接判讀結(jié)果,。

檢測(cè)原理：利用兩對(duì)特殊引物和具有鏈置換活性的 Bst DNA 聚合酶,，使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu)，引物順利與模板結(jié)合并進(jìn)行鏈置換擴(kuò)增反應(yīng),，實(shí)現(xiàn)在恒溫條件下（60-65℃）進(jìn)行連續(xù)快速擴(kuò)增,。反應(yīng)加入顯色指示劑，陰陽性結(jié)果顯色差異顯著,，可直接通過顏色變化判讀結(jié)果,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
      1. 快速簡(jiǎn)便：將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理,，增加試劑穩(wěn)定性,，使用時(shí)減少溶液配制步驟，更為便捷,，整個(gè)檢測(cè)反應(yīng)可在 1 h 內(nèi)完成,；
      2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個(gè)獨(dú)立區(qū)域設(shè)計(jì)多條引物，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性,；
      3. 靈敏度高：最-低檢驗(yàn)限達(dá)到 29 CFU/Test,；
      4. 判讀簡(jiǎn)單：反應(yīng)前加入顯色指示劑，反應(yīng)后通過肉眼觀察反應(yīng)液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測(cè)儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結(jié)果，直觀方便,，且可有效避免反應(yīng)后開蓋造成的氣溶膠污染,。

大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品組分：

儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期：2~8℃條件下儲(chǔ)存，有效期為12個(gè)月,。

適用儀器：
      1. PCR儀器或金屬浴恒溫器,，如果檢測(cè)樣品為DNA樣品，水浴鍋即可,。
      2. 高速離心機(jī),，樣品的前處理需要用高速離心機(jī)做分離。

樣品富集：
      1. 樣品前處理：取 25 g 待檢樣品置于 225 mL 改良 EC肉湯中,，前增菌 10-12 h,，對(duì)增菌液中的菌體富集用于LAMP 快速檢測(cè)。
      2. 適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品,。
      3. 待測(cè)樣品存放：粗提的待檢 DNA 樣品保存于-4~0℃,，不應(yīng)該超過 24 h；利用試劑盒提取的 DNA 樣品可在-20℃長(zhǎng)期保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

恒溫?zé)晒夥ê怂峥焖贆z測(cè)試劑盒操作流程

大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測(cè)試劑盒使用指南：

1，樣品前處理

   A. 樣品增菌液模板DNA的制備：
         a) 在檢測(cè)食品中大腸桿菌 O157:H7 時(shí),，吸增菌液 1 mL到 1.5 mL 規(guī)格的無菌離心管中,，6000 r/min 離心5 min，棄上清,，用50 μL無菌超純水懸浮洗滌沉淀1-2次,，6000 r/min 離心 5 min，完-全去除上清,；
         b) 加入 30 μL 裂解液,，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡,，99℃加熱 10 min,；
         c) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為粗提的 DNA,，可轉(zhuǎn)移至 0.2 mL 無菌離心管中,，在-20℃下可長(zhǎng)期保存,。

   B. 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，懸浮到含 30 μL 裂解液的無菌離心管中,，后按照上述步驟 b),、c)操作。

2，陰,、陽性對(duì)照和干粉試劑復(fù)溶

   A. 陰,、陽性對(duì)照復(fù)溶：首-次使用時(shí)，加入 80 μL 超純水至陽性對(duì)照和陰性對(duì)照凍干粉中,，待溶解后混勻,，-20℃存儲(chǔ)待用。
   B. 干粉試劑復(fù)溶：取出凍干粉試劑,，按照需求剪取 n 個(gè)檢測(cè)試劑管（n=待檢測(cè)樣品數(shù)+1 管陽性對(duì)照+1 管陰性對(duì)照）,，每管加入 20 μL 復(fù)溶液，完-全溶解后待用,。

3,，擴(kuò)增反應(yīng)
   A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設(shè)置到 64℃待用,；
   B. 向上述已加入復(fù)溶液的 n 個(gè)反應(yīng)管中各加入顯色指示劑 2.5 μL,；
   C. 向上述已加入復(fù)溶液的 n 個(gè)反應(yīng)管中分別加入待測(cè)樣品核酸、陰性對(duì)照,、陽性對(duì)照各 2.5 μL，蓋緊蓋子,；
   D. 將所有的反應(yīng)管置于恒溫儀器中，反應(yīng) 50 min,。

4,，結(jié)果判讀：反應(yīng)結(jié)束后,，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結(jié)果,，陰性對(duì)照檢測(cè)試劑管呈淡橙色，陽性對(duì)照檢測(cè)試劑管呈熒光綠,，待測(cè)樣品反應(yīng)管以此作為對(duì)照進(jìn)行判讀,，若陰陽對(duì)照反應(yīng)管任一結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測(cè)結(jié)果無效,，應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系,。

恒溫?zé)晒夥ê怂峥焖贆z測(cè)試劑盒靈敏度對(duì)比

大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?用于食品中大腸桿菌O157:H7的快速檢測(cè)。

大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥?用于食品中大腸桿菌O157:H7的快速檢測(cè),。