軍團(tuán)菌是一種環(huán)境感染性致病菌,，可引起急性呼吸道傳染病,，即軍團(tuán)菌病,。軍團(tuán)菌分布極其廣泛,，醫(yī)院,、酒店等的供水系統(tǒng)、空調(diào)的冷卻系統(tǒng)等各種水源均易于滋生,、污染軍團(tuán)菌,，并造成軍團(tuán)菌病傳染的風(fēng)險(xiǎn)。即與水有關(guān)的地方均可能存在軍團(tuán)菌,。

　　軍團(tuán)菌傳播,、感染有以下特點(diǎn)：

1、透過(guò)空氣,、水份感染,，傳播帶季節(jié)性，超過(guò)50%病例在夏季發(fā)生,。

2,、滋生在醫(yī)院、酒店的供水系統(tǒng),，通過(guò)過(guò)水,、浴室傳播。

3,、可通過(guò)空調(diào)的冷卻系統(tǒng),，由通風(fēng)口傳播并感染對(duì)象。

　　軍團(tuán)菌屬革蘭氏陰性桿菌,，專性需氧,，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜,，軍團(tuán)菌需要半胱氨酸和鐵,，無(wú)半胱氨酸時(shí),，軍團(tuán)菌無(wú)法生長(zhǎng)。生化特征還有不發(fā)酵也不氧化糖類,，不還原硝酸鹽,，氧化酶實(shí)驗(yàn)陰性或弱陽(yáng)性，尿素酶陰性,，軍團(tuán)菌生長(zhǎng)的zui適pH為6.9-7.0,，2%-5%CO2能促進(jìn)部分菌株的生長(zhǎng)。軍團(tuán)菌生長(zhǎng)緩慢,，易于被其它菌落覆蓋,。軍團(tuán)菌的菌落顏色多樣，通常呈白色,、灰色,、藍(lán)色或紫色，也能顯深褐色,、灰綠色,、深紅色。菌落整齊,，表面光滑,，在紫外燈下，有熒光,。目前軍團(tuán)菌分為64種血清型及42個(gè)種,。

 二、軍團(tuán)菌的檢測(cè)方法---ISO11731:1998 

1.范圍

 本標(biāo)準(zhǔn)描述了一種用于軍團(tuán)菌分離和估計(jì)環(huán)境樣品中軍團(tuán)菌數(shù)量的培養(yǎng)方法,。該方法適用于所有環(huán)境樣本,，包括飲用水、工業(yè)用水和天然水以及沉淀物,、沉積物和粘土/軟泥等相關(guān)樣本,。

2.培養(yǎng)基和試劑

2.1：CP0020 BCYE平板（軍團(tuán)菌生長(zhǎng)平板）                 

2.2：P0030 BCYE-CYS平板（BCYE無(wú)L-半胱氨酸平板）      

2.3：CP0040 GVPC選擇性平板（軍團(tuán)菌選擇性平板）       

2.4：酸處理緩沖液

3．取樣

3.1取樣容器

水樣可采用玻璃、聚乙烯或類似容器,。以前用過(guò)的容器應(yīng)該清洗干凈,、扣干水分，121℃高壓滅菌15min,。如果容器不能經(jīng)受高壓滅菌,，應(yīng)在高于70℃的流動(dòng)熱水或流動(dòng)蒸汽中處理至少5min。

3.2含生物防腐劑的樣品

如果水樣中含有或被認(rèn)為含有氧化型生物防腐劑,，應(yīng)在取樣時(shí)或取樣前加入非活性試劑加以中和,。如果水樣中含有消毒劑，需在采樣前或采樣后加入中和劑，含氯或氧化型消毒劑可用流代流酸鈉或硫代硫酸鉀作中和劑,。原則上講,，實(shí)驗(yàn)室接到水樣后應(yīng)盡快進(jìn)行微生物學(xué)分析，是取樣當(dāng)天,，尤其對(duì)于已知含生物防腐劑的樣品,。因此，建議從樣品采集到制備好濃縮樣的間隔為2d,，不應(yīng)超過(guò)5d,，zui長(zhǎng)不超過(guò)14d。

 3.3樣品運(yùn)輸

樣品應(yīng)在6-18℃條件下被運(yùn)輸,，應(yīng)避免熱和光照,，在1d內(nèi)，不超過(guò)2d將樣品送到實(shí)驗(yàn)室,。

4．制樣

4.1 總則

如果液體樣品軍團(tuán)菌的數(shù)量估計(jì)超過(guò)105CFU/L,，可以采用直接平板法，即直接涂布于GVPC平板,。為了確保低于這個(gè)數(shù)量樣品中軍團(tuán)菌的檢測(cè),，需采用濃縮技術(shù)。為了濃縮水樣,，可采用膜過(guò)濾法（4.2）或離心法（4.3）,。

4.2膜過(guò)濾法

如果樣品是渾濁的、乳濁的或有顏色的,，應(yīng)采用離心法。采用MFS型膜過(guò)濾裝置進(jìn)行膜過(guò)濾,，采用直徑47mm,，孔徑0.22μm和0.45μm的無(wú)菌白底黑格膜。過(guò)濾后的膜應(yīng)放置在帶蓋的無(wú)菌容器中,，可用無(wú)菌剪刀剪碎,，加5ml-25ml的無(wú)菌稀釋液或無(wú)菌去離子水，不斷搖動(dòng)至少2min,。也可將容器放入超聲波中2-10min,。

4.3.離心法

取200ml樣品于300-500ml容積的離心瓶中，6000g離心10min或3000g離心30min,，保持溫度在15-25℃,，棄去上清液，將沉淀物懸浮在2-20ml無(wú)菌稀釋液或無(wú)菌去離子水中,。

培養(yǎng)

5.1.將制備好的樣品（濃縮的或未濃縮的）分成3份,，1份不做任何處理；1份進(jìn)行熱處理；1份進(jìn)行酸處理,。

5.2熱處理：加1±0.5ml樣品于一無(wú)菌容器中,，50±1℃水浴處理30±2min。

5.3.酸處理:加1-10ml樣品于一擰蓋的容器中,，6000g離心10min或3000g離心30min,，用無(wú)菌槍頭吸去一半體積的上清液，通過(guò)渦旋重新懸浮剩余物用酸處理緩沖液補(bǔ)足原始體積,?；旌响o置5±0.5min。

5.4.革蘭氏染色:團(tuán)菌生長(zhǎng)較慢,，次日生長(zhǎng)的菌落可直接棄去,。軍團(tuán)菌菌落顏色多樣，通常呈白色,、灰色,、藍(lán)色或紫色，也能顯深褐色,、灰綠色,、深紅色。菌落整齊,，表面光滑,，在紫外燈下有熒光。軍團(tuán)菌為革蘭氏陰性桿菌,。

5.4.菌落驗(yàn)證:從每個(gè)平皿上選幾個(gè)可疑菌落,，接種BCYE、BCYE-Cys平板和血平板進(jìn)行傳代培養(yǎng),，凡在BCYE平板上生長(zhǎng),，而在BCYE-Cys平板上不生長(zhǎng)的菌極可能是軍團(tuán)菌。

5.5.軍團(tuán)菌計(jì)數(shù)：從三個(gè)GVPC平板中選擇確證菌數(shù)zui多的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),，再除以濃縮倍數(shù),，作為軍團(tuán)菌數(shù)的估計(jì)值。