4  測試方法

4.1  方法提要

   本方法采用計(jì)數(shù)濃度法,，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基,，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),，從而判定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中的活微生物數(shù),，以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。

4.2  所用的儀器,、設(shè)備和培養(yǎng)基

    a）浮游菌采樣器,；

    b）真空抽氣泵；

    c）培養(yǎng)皿,；

    d）培養(yǎng)基,；

    e）恒溫培養(yǎng)箱。

4.3  浮游菌采樣器

    浮游菌采樣器宜采用撞擊法機(jī)理的采樣器,，一般采用狹縫式采樣器或離心式采樣器,。

4.3.1  采用的浮游菌采樣器必須要有流量計(jì)和定時(shí)器。

4.3.2  狹縫式采樣器的原理

   狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣,，通過采樣器的縫隙式平板,，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉(zhuǎn)的平板培養(yǎng)基表面上,，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計(jì)數(shù),。

4.3.3  離心式采樣器的原理

   離心式采樣器由于內(nèi)部風(fēng)機(jī)的高速旋轉(zhuǎn),，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下,，空氣中的活微生物粒子有足夠的時(shí)間撞擊到的固形培養(yǎng)條上,，經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計(jì)數(shù),。

4.3.4  狹縫式采樣器的使用要點(diǎn)

    應(yīng)嚴(yán)格按儀器說明書的要求進(jìn)行操作,。

4.3.4.1  校驗(yàn)

   采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定,，以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性,。校驗(yàn)的項(xiàng)目有：定時(shí)器、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速,、流量計(jì),。

4.3.2  每次測試前應(yīng)按說明書上的規(guī)定，先接通電源,，啟動(dòng)真空抽氣泵,，然后調(diào)節(jié)流量計(jì)及定時(shí)器。

4.3.4.3 空氣采樣量根據(jù)需要選定,。已知采樣器的流量（L/min）,，設(shè)定采樣時(shí)間（min），兩者相乘即采樣量（L）,。

4.3.4.4  注意事項(xiàng)

4.3.4.4.1  采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造,。

4.3.4.4.2  采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑,。

4.3.4.4.3  采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測點(diǎn)的高度定,，盡量減少彎曲。

4.4  真空抽氣泵

4.4.1  真空抽氣泵的排氣量應(yīng)與采樣器匹配,。

4.4.2   宜采用無油真空抽氣泵,，必要時(shí)可在非氣口安裝氣體過濾器。

4.4.3  真空抽氣泵安裝的位置必須適當(dāng),，一般裝在采樣器下面,。

4.5  培養(yǎng)皿

4.5.1  狹縫式采樣器一般采用Æ 150mm×15mm、Æ 90mm×15mm,、Æ65mm×15mm三種規(guī)格的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿,。可根據(jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿,。

4.5.2  離心式采樣器采用的固形培養(yǎng)條,。

4.6  培養(yǎng)基

    普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認(rèn)可的培養(yǎng)基,。其配制方法見附錄A（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。

4.7  恒溫培養(yǎng)箱

    必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定,。

4.8  測試步驟

4.8.1  測試前儀器,、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。

4.8.1.1  采樣器進(jìn)入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌,，用于100級潔凈室的采樣器宜一直放在被測房間內(nèi),。

4.8.1.2  用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。

4.8.1.3 采樣前,，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面,，采樣結(jié)束,，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。

4.8.1.4 采樣口及采樣管,，使用前必須高溫滅菌,。如用消毒劑對采樣管的外壁及內(nèi)壁進(jìn)行消毒時(shí)，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干,。

4.8.1.5  采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服,，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒,。

4.8.2  狹縫式采樣器的采樣程序

4.8.2.1 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿,，開動(dòng)真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā),，時(shí)間不少于5min,，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速,。

4.8.2.2  關(guān)閉真空泵,，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度,。

4.8.2.3  置采樣口于采樣點(diǎn)后,，依次開啟采樣器、真空泵,，轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器,，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。

4.8.3  培養(yǎng)

4.8.3.1  全部采樣結(jié)束后,，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

4.8.3.2  在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于48h,。

4.8.3.3  每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗(yàn),，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染,。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng),。

4.8.4  菌落計(jì)數(shù)

4.8.4.1  用肉眼直接計(jì)數(shù),、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5～10倍放大鏡檢查,，有否遺漏,。

4.8.4.2  若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù),。

4.8.5  注意事項(xiàng)

4.8.5.1  使用前仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量,，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用,。

4.8.5.2  采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染,。

4.8.5.3  對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄,。

4.8.5.4 由于細(xì)菌種類繁多,，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察,，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落,，并須注意細(xì)菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別,。
經(jīng)營：自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀   脈沖均質(zhì)器  浮游菌采樣器