真菌是一類(lèi)多樣性豐富的微生物,，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)和不斷的傳代需要，真菌的毒力,、致病性,、生長(zhǎng)速度等基本特性會(huì)發(fā)生改變。為了最大限度保持真菌的活性,、形態(tài)學(xué),、生理學(xué)、遺傳完整性等特性,，往往需要幾種培養(yǎng)和保存方法,。理想情況下，保存的菌種在長(zhǎng)期保存下仍具有活性,，但處于靜止?fàn)顟B(tài),，以防突變的積累導(dǎo)致形本學(xué)和生化特性的改變。常用的菌種保存方法有持續(xù)傳代,，保存于無(wú)菌水,、土壤或礦物油中，冷凍或真空干燥等,。

持續(xù)傳代法是將真菌持續(xù)地在瓊脂上接種生長(zhǎng),，是一種短期的保存方法,。將培養(yǎng)物存放于4~25℃ 或?qū)⑵淅鋬隹梢栽黾觽鞔拈g隔,。將真菌保存于無(wú)菌水放置在室溫是一種簡(jiǎn)易經(jīng)濟(jì)的方法，但真菌細(xì)胞的穩(wěn)定性無(wú)法得到保障,。利用冷凍法,，如液氮或低溫(一20℃和-80℃)可以較好地彌補(bǔ)水保存法的不足。國(guó)際上的一些真菌研究機(jī)構(gòu)推薦使用冷凍法和凍干法進(jìn)行菌種保存,。盡管對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行凍干可以長(zhǎng)期保證細(xì)胞的穩(wěn)定性,，但整個(gè)程序冗長(zhǎng)耗時(shí)，且需要昂貴的設(shè)備,。因此冷凍法的使用最為廣泛,，大多數(shù)真菌可使用此法進(jìn)行保存。

一,、水保存法

1）操作步驟
1,、將真菌接種在帶螺口蓋的玻璃管PDA斜面培養(yǎng)基,，置于25℃培養(yǎng)2周，向培養(yǎng)管內(nèi)加入6~7ml 的無(wú)菌蒸餾水,。 
2,、使用移液器槍頭在斜面上輕輕刮取孢子或菌絲片段，收集上清懸液并轉(zhuǎn)移至無(wú)菌的帶螺口瓶?jī)?nèi),。 
3,、將瓶蓋旋緊，以防止水分的蒸發(fā),，如發(fā)生蒸發(fā)可定期添加無(wú)菌蒸餾水,，在瓶上做好標(biāo)記儲(chǔ)存于室溫。 

2）活性檢測(cè)：無(wú)菌條件下從瓶?jī)?nèi)吸取0.3ml懸液接種至SDA或PDA斜面,，于25℃培養(yǎng)3周,，定期觀察生長(zhǎng)情況3周后如無(wú)生長(zhǎng)，或重復(fù)轉(zhuǎn)種培養(yǎng)后仍無(wú)生長(zhǎng),，表明保種物無(wú)活性,。

二、冷凍保存法

1）操作步驟：
1,、將真菌接種在帶螺口蓋的聚丙烯管PDA斜面培養(yǎng)基,，置于25℃培養(yǎng)2周。 
2,、旋緊瓶蓋,，置于冷凍冰箱(-20℃以下) 。

2）活性檢測(cè)：從冰箱取出培養(yǎng)管,，自冰凍的PDA斜面挖取一小部分菌落接種至另一PDA斜面培養(yǎng)基,，于25 ℃培養(yǎng)至少3周。如復(fù)蘇生長(zhǎng)的菌落特點(diǎn)與保種之前的特性一致,，表明保種切實(shí)可行,；如轉(zhuǎn)種的菌落無(wú)生長(zhǎng)或菌落的特性與初始特性不一致，按上述方法重復(fù)轉(zhuǎn)種,。如第二次轉(zhuǎn)種仍無(wú)生長(zhǎng)表明保種失敗,。 
注意：培養(yǎng)管自冰箱取出后應(yīng)盡快操作，避免融化,，盡快放回冰箱,，否則影響真菌的存活率。 

三,、礦物油浸沒(méi)法

1）操作步驟：
1,、準(zhǔn)備高等級(jí)的礦物油，121℃高壓15min,。 
2,、將真菌接種在帶螺口蓋的玻璃管PDA斜面培養(yǎng)基,，置于25℃培養(yǎng)2周。
3,、向培養(yǎng)管內(nèi)加入礦物油,，以礦物油高出斜面1cm為宜，確保培養(yǎng)管的斜面和所有菌落完quan被浸沒(méi),。
4,、將培養(yǎng)管直立放置于室溫，定期觀察礦物油水平及含量,，必要時(shí)適量添加,。 

2）活性檢測(cè)：從保種培養(yǎng)斜面挑取小量菌落接種至適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基(PDA或SDA),取菌時(shí)盡量瀝去礦物油。由于菌落黏附礦物油,，菌落的生長(zhǎng)速度會(huì)較慢,，可能需要傳代多次。理想的操作方法可以將菌落接種在斜面培養(yǎng)基的中點(diǎn),，可以使多余的礦物油流至管底,。 

四、冷凍干燥法

冷凍干燥保存適合產(chǎn)孢的真菌,，特別是一些能夠產(chǎn)生子囊孢子和分生孢子的真菌,，保存周期長(zhǎng)，可達(dá)20~40年,。 

1）操作步驟：
1,、將真菌接種在帶螺口蓋的玻璃管PDA斜面培養(yǎng)基，置于25℃培養(yǎng)至生長(zhǎng)良好,。
2,、刮取適量真菌與保護(hù)劑(如脫脂牛奶)混勻后，加入安瓿瓶中,，在一40℃冰箱預(yù)冷2h,。 
3、置于冷凍干燥機(jī)上冷凍干燥8~20h,，熔封,。 
4,、測(cè)定真空度,，合格后2-8℃保存。

2）活性檢測(cè)：配制液體SGA或者M(jìn)EA培養(yǎng)基,，安瓿瓶打開(kāi)后將粉末倒入以上培養(yǎng)基,，適宜條件下生長(zhǎng)1~3周， 保存良好的菌落可以恢復(fù)生長(zhǎng),。