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在我們?nèi)粘5奈⑸餀z測工作和進(jìn)行的某些實驗中,,經(jīng)常會遇到需要預(yù)估細(xì)菌懸液的細(xì)菌濃度問題,有時候我們需要精確計數(shù)細(xì)菌菌液濃度,會用到血球計數(shù)板來進(jìn)行計數(shù),;但有時我們只需要一個比較粗略的估計值即可,這里小編推薦大家使用麥?zhǔn)媳葷岱ā?/span>
麥?zhǔn)媳葷峁苁荕cFarland發(fā)明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標(biāo)準(zhǔn)濁度管,。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來定的,,有表可查,這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同,,且都有定值,。麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔热缦拢?/span>
這是傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁艿呐渲品椒ǎ壳耙灿惺惺鄣纳唐坊a(chǎn)品,,不需要自己配制,,并且還有由乳膠粒子懸浮液制成的麥?zhǔn)媳葷峁埽c傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁芟啾?,保存時間更長也更穩(wěn)定,。但麥?zhǔn)媳葷峁芫唧w應(yīng)該怎么使用呢,?
麥?zhǔn)媳葷峁芄烙嫅乙褐械募?xì)菌濃度具體操作方法
1、輕搖標(biāo)準(zhǔn)試管,。
2,、無菌操作將被測定的肉湯培養(yǎng)物加到與標(biāo)準(zhǔn)管相同直徑(大小)的無菌試管中,。
3,、以無菌操作向被測定試管加入無菌生理鹽水(NaCl),直到濃度與所要求的標(biāo)準(zhǔn)管的濃度相同,。
4,、直接用眼睛看(需要經(jīng)驗,誤差較大),。
5,、找張白紙,打上平行直線,,然后觀察讀數(shù)(如圖示,,利用光在不同濃度液體折射不同)。
例如,,需配大約100cfu/mL 的細(xì)菌菌液濃度:
1. 無菌操作用接種環(huán)挑取測試細(xì)菌的純培養(yǎng)物到盛有一定量無菌生理鹽水管中,,混懸。
2. 以比色卡作為背景目測,,直到濁度與0.5 麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)管的濁度相一致,,如上圖所示。
3. 0.5 號麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管相當(dāng)于1×108CFU/mL 濃度,,以此為參照值,,取1mL 濁度跟0.5 號麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管相一致的菌懸液到9mL 無菌生理鹽水管中,作10 倍梯度稀釋107,、106,、105……,102 稀釋度含菌量大約為100cfu/mL,。
注:1. 測試菌的純培養(yǎng)物可以是凍干菌株復(fù)蘇后純培養(yǎng)物,。
2.本法僅供細(xì)菌液濃度的粗略計算。
注意事項:
1,、如果測定的肉湯培養(yǎng)物不澄清,,由培養(yǎng)物的值減去未接種培養(yǎng)基的值來校正細(xì)菌濃度。
2,、如果肉湯顏色很深,,把未接種試管放在標(biāo)準(zhǔn)管的后面讀數(shù)即可。
3,、測定好的細(xì)菌,,可以做一下梯度稀釋涂布計數(shù),。
4、此種方法測定的準(zhǔn)確性不是很高,,如果是對細(xì)菌數(shù)量要求較精確的,,請用紫外分光光度計。
5,、麥?zhǔn)媳葷嵋簯?yīng)放室溫暗處保存,,用前混勻,有效期為6個月,。應(yīng)用時為了準(zhǔn)確也可以使用比濁儀但一定要防止麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管未搖勻或已過期失效,。
在微生物學(xué)檢驗中,麥?zhǔn)媳葷岱ǔW鳛榧?xì)菌鑒定,、實驗配制菌液時大致判斷細(xì)菌菌液濃度的一種方法,,通常認(rèn)為,如將配細(xì)菌菌液濃度配成0.5麥?zhǔn)媳葷峁軙r,,相當(dāng)于1.0×108細(xì)菌數(shù)/ml,,由于方法本身就是一種估計的方法,所以盡管不同細(xì)菌大小差異很大,,但除了真菌孢子,細(xì)菌的差別不大,,結(jié)果不會有影響,。
附孢子菌懸液制作方法:
1. 菌種活化
將保藏菌接種在PDA斜面培養(yǎng)基試管中,培養(yǎng)7d~14d,,使生成大量孢子,。未制備孢子懸液時,不得拔去棉塞,。每打開1支只供制備1次懸液,,每次制備孢子懸液必須使用新培養(yǎng)的霉菌孢子。
2. 孢子懸液制備
在上述PDA斜面培養(yǎng)基中加入少量無菌蒸餾水,,用無菌接種環(huán)輕輕刮取表面的新鮮霉菌孢子,,將孢子懸液置于250mL錐形瓶內(nèi),然后注入40mL洗脫液,。
錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10?!?5粒與孢子混合,具塞后置水浴振蕩器中不斷振蕩使成團(tuán)的孢子散開,,然后用單層棉紗布過濾以除去菌絲,。將其裝入滅菌離心管中,用離心機(jī)分離沉淀孢子,,去上清液,。再加入40mL洗脫液,,重復(fù)離心操作3次。制成濃度為(0.8~1.2)×106spores/mL的霉菌孢子懸液,。若需要精確計數(shù),,則可以用改良察氏液體培養(yǎng)基稀釋孢子懸液,用血球計數(shù)板計數(shù),。孢子懸液應(yīng)在當(dāng)天使用,,若不在當(dāng)天使用應(yīng)在 3℃~7℃保存,并盡量在4d內(nèi)使用,。
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