產(chǎn)品名稱：大鼠C肽（C-P）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
規(guī)格：原裝/96T 分裝 48T/96T
本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關液體樣本中C肽（C-P）含量,。
標本處理及要求
1．血清,、血漿標本可直接測定；
2．尿液,、腦脊液,、腹腔液：2000-3000轉/分離心10分鐘后，取上清液待測,。
3．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
4．采集后盡早進行實驗,，若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融。
自備物品
1 ,、 37 ℃ 恒溫箱
2 ,、 標準規(guī)格酶標儀
3 、 精密移液器及一次性吸頭
4 ,、 蒸餾水
5 、 一次性試管
6 ,、 吸水紙
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,，在*、第二孔中分別加標
準品 100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二
孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔
中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，
濃度分別為180ng/L，120ng/L ,，60ng/L,，30ng/L,， 15ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混
勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復 5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11. 測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行,。
計算
    以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 嚴格按說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
6．本試劑不同批號組分不得混用。
7．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．底物請避光保存,。
檢測范圍：
7.5ng/L -250ng/L
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個月