兔出血癥病毒elisa試劑盒

目的：本試劑盒用于測(cè)定兔血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中出血癥病毒抗體。本試劑僅供研究使用

實(shí)驗(yàn)原理：
   本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中兔出血癥病毒抗體,。用純化
的兔出血癥病毒抗原包被微孔板,，制成固相抗原，可與樣品中出血癥病毒抗體相結(jié)合,，經(jīng)洗
滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,，再與 HRP 標(biāo)記的兔出血癥病毒抗原結(jié)合，形成抗原-
抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成
藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，
與 CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中兔出血癥病毒抗體的存在與否。
試劑盒組成：
試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存
說(shuō)明書(shū) 1 份 1 份
封板膜 2 片（48） 2 片（96）
密封袋 1 個(gè) 1 個(gè)
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
陰性對(duì)照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標(biāo)試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存
樣本處理及要求：
1.  血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上
清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。
2.  血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后,，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次
離心,。
3.  尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過(guò)程
中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實(shí)行。
4.  細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/
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分）。仔細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞
濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,。通過(guò)反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分
鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
5.  組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱(chēng)取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待
檢測(cè)，其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上
進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.  不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因 NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟：
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔,、陽(yáng)性對(duì)照2 孔,、空白對(duì)照1
孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測(cè)樣品 10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不
觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。  
4. 配液：將30（48T的 20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復(fù) 5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15分鐘
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.15
   臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.20
   陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為兔出血癥病毒抗體陰性
   陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為兔出血癥病毒抗體陽(yáng)性
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
5．底物請(qǐng)避光保存,。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),，參考波長(zhǎng)為630nm
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,，使用時(shí)必須
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注意安全,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6個(gè)月