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慶大霉素快速檢測試劑盒說明書

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所在地上海市

更新時間:2025-01-14 10:53:11瀏覽次數(shù):2253次

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供貨周期 現(xiàn)貨 貨號 YJ2016
應用領域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品
慶大霉素快速檢測試劑盒說明書,,公司的獸藥殘留快速檢測試劑盒(例:克倫特羅檢測試劑盒、氯霉素檢測試劑盒,、硝基呋喃類檢測試劑盒),、動物疾病診斷試劑(例:豬弓形蟲抗體檢測試劑盒,、豬藍耳病檢測試劑盒、豬瘟病毒檢測試劑盒),、分子生物學工具酶,、綠色水產藥品等一系列的產品已在國家機關、企業(yè),、科研單位廣為應用,。

 

 

慶大霉素快速檢測試劑盒說明書

 

一、原理

 

本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法,,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,,樣本中的殘留物慶大霉素將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗慶大霉素抗體,加入酶標記物后,,用 TMB 底物顯色,,樣本吸光值與其所含殘留物慶大霉素的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物慶大霉素的含量,。

 

二,、試劑盒特性

 

  • 試劑盒靈敏度:  0.05ppb

 

u 孵育溫度: 25

 

u 孵育時間: 30min15min

 

  • 樣本檢測下限

 

組織 ············································

2.5 ppb

肝臟

··············································

3 ppb

牛奶

··············································

3 ppb

 

  • 交叉反應率

 

慶大霉素

······································

100%

鏈霉素

·······································

<1%

雙氫鏈霉素 ········································

<1%

新霉素

··········································

<1%

 

  • 樣本回收率

 

組織 ······································ 90%±20%

 

肝臟 ······································ 80%±20%

 

牛奶 ·······································   90%±18%

 

三、試劑盒組成

 

1

微量測試孔

每條 8 孔,,一板 12 條

 

 

 

 

 

標準液×6 瓶

0ppb

0.05ppb

2

0.15ppb

0.45ppb

1ml/瓶)

 

1.35ppb

4.05ppb

 

 

 

 

 

 

 

3

酶標記物

7ml

紅色帽

 

 

 

 

4

抗體工作液

7ml

藍色帽

 

 

 

 

5

底物 A 液

7ml

白色帽

 

 

 

 

6

底物 B 液

7ml

黑色帽

 

 

 

 

7

終止液

7ml

黃色帽

 

 

 

 

8

20X 濃縮洗滌液

15ml

白色帽

 

 

 

 

9

樣本復溶液

50ml

透明帽

 

 

 

 

10

10x 濃縮提取液

50ml

藍色帽

 

 

 

 

 

四,、所用儀器、試劑

 

具備的儀器:酶標儀,、均質器,、振蕩器、離心機,、刻度移液管,、天平(感量 0.01g)、恒溫箱

 

微量移液器:單道 20200µl,、單道 1001000µl,、

 

多道 30300 µl

 

五、樣本前處理步驟

 

  • 樣本處理前須知

 

a)實驗中必須使用一次性吸頭,,吸取不同試劑時要更換吸頭,。

 

b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,,以避免污染干擾實驗結果,。

 

  • 樣本前處理需配制:配液 1 樣本提取液:

 

  • 10X 濃縮提取液用去離子水按 19 稀釋。
  • 樣本處理:

 

a)組織(雞肉,、豬肉,、魚肉、蝦)、肝臟(雞肝,、豬肝)樣本處理方法

1,、取 1±0.05g 去除脂肪的粉碎樣本,加入 5ml 樣本提取液,,振蕩 3min,;4000r/min,室溫離心

 

10min,;2,、取 50µl 上清液,加入 450µl 樣本復溶液混勻,,

 

混合 30s,;3、取 50µl 用于分析,。

 

樣本稀釋倍數(shù):50

 

b) 牛奶樣本處理方法

 

1,、取 0.5ml 均質的牛奶樣本,加入 2ml 樣本提取

 

液,,振蕩 2min,;4000r/min,室溫離心 5min,;2,、取 50µl 上清液,加入 450µl 樣本復溶液混勻,,

混合 30s3,、取 50µl 用于分析,。

 

樣本稀釋倍數(shù):50

 

六、酶標免疫分析程序:

 

  • 測定前應須知:

 

1,、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫

 

2025℃),。

 

2、 使用之后立即將所有試劑放回 28℃,。

 

3,、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性,,正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點,。

 

4、 所有恒溫孵育過程,,避免光線照射,,用蓋板膜蓋住微孔板。

  • 操作步驟:

 

1、從 28℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,,室溫(20

 

25℃)平衡 30min 以上,,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

 

2,、取出框架及需要數(shù)量的微孔,,將不用的微孔放

 

入自封袋,保存于 2-8℃,。

 

3,、配液:將 15ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去離子水按照 119 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份

去離子水),或按所需用量配制洗滌液,。4,、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每

 

個樣本和標準品做 2 孔平行,,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置,。

 

5、加標準品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中,,加入酶標記物 50µl/孔,,然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔,用蓋板膜封板,,25℃環(huán)境中反應 30min,。

 

6、將孔內液體甩干,,用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 45 次,,每次間隔 1530 秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破),。

 

7,、顯色:加入底物 A  50µl/孔,再加入底物 B 50µl/孔,,輕輕振蕩混勻,,25℃環(huán)境中避光顯色 15min,。

 

8,、測定:加入終止液 50µl/孔,,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于 450nm 處(建議用雙波長 450/630n m 檢測,,5min 內讀數(shù)),,測定每孔 OD 值。

 

七,、結果判定

 

結果判定有兩種方法,,粗略判定可用第 1 種方法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含慶大霉素量成負相關,。

 

1,、粗略判定:

 

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本 1 的吸光度值為 0.3,,樣本 2 的吸光度值為 1.0,,標準液吸光度值分別是:

 

0ppb  2.2430.05ppb  1.816,;0.15ppb  1.415,; 0.45ppb  0.741.35ppb  0.313,;4.05ppb  0.155,。則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb4.05ppb;樣本 2

 

的濃度范圍是 0.15ppb0.45ppb,,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大霉素實際濃度,。

2、定量分析

 

1)百分吸光率的計算,,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標準(0 標準)的吸光度值,,再乘以 100%,即

 

B

百分吸光率(%)= ×100%

B0

 

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標準溶液的平均吸光度值

 

2)標準曲線的繪制與計算以標準品百分吸光率為縱坐標,,以慶大霉素標

 

準品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大霉素實際濃度。

 

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,,更便于大量樣本的準確,、快速分析。

 

 

八,、 注意事項

 

1、室溫低于 25℃或試劑及標本未回到室溫(20

 

25℃)會導致所有標準的 OD 值偏低,。

 

2,、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,,重復性不好的現(xiàn)象,。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

 

3,、混合要均勻,,否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。

 

4、反應終止液為 2M 硫酸,,避免接觸皮膚,。

 

5、不要使用過了有效日期的試劑盒,;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度,、OD 值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑,。

 

6,、不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感,,因此要避免直接暴露在光線下,。

 

7、顯色液若有任何顏色表明變質,,應當棄之,。標準品 1 的吸光度值小于 0.5 時,表示試劑可能變質,。

 

8,、該試劑盒理想反應溫度為 25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化,。

 

九,、儲藏條件和保質期

 

1、儲藏條件:試劑盒于 28℃保存,,不要冷凍,。

 

2、保 質 期:該產品有效期為 1 年,,生產日期見包裝盒,。

 

提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,,不影響實驗結果,,請放心使用。

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