改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液

產(chǎn)品簡介：

蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色簡稱 HE 染色,，是病理學和組織學常用的一種染色方法,。蘇木精為堿性天然染料,，可使細胞核著色,。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的主要成分是DNA,，在DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷,，呈酸性,，很容易不帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。

改良Lillie-Mayer 蘇木素染色液無毒,，無氧化膜,，細胞核染色質(zhì)著色深而細微，臨床上常替代Harris 蘇木素染色液,。對細胞核染色很清晰,，不著染胞質(zhì)和纖維成分，屬進行性

染色,，故染色后可以不用鹽酸乙醇分化,，染色時間約 5～8min，如果是充分氧化后可染色 3～

5min,。常用于糖原等特染、酶組化和免疫組化等染色后復染細胞核作對照染色，尤其適用  于經(jīng)過特殊染色后不能經(jīng)酸處理時對細胞核的復染,。在特殊染色中,，常不天青石藍B液聯(lián)合染色，使細胞核染色后不被后續(xù)的酸性染料所褪色,。

染色原理：

1、細胞核染色的原理：

蘇木素為堿性天然染料，可使細胞核著色,。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA

雙螺旋結(jié)構(gòu)中,，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,，使DNA 雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性,，很容易不帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色,。蘇木素在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色,。

2,、細胞漿染色的原理：

伊紅是一種化學合成的酸性染料，在一定條件下可使細胞漿著色,。細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì),，為兩性化合物，細胞漿的染色不染液的 pH 值密切相關(guān),。當染色液 pH 值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(4.7～5.0)以下時,，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細胞漿帶正電荷,，就可   被帶負電荷的酸性染料染色,。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子，不胞漿蛋白質(zhì)帶正

電荷的陽離子結(jié)合,，使細胞漿著色,，呈現(xiàn)紅色。

3,、分化作用：

染色后,，用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用,，所 用的溶液稱為分化液,。在HE 染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),，使組織不色素分離而退色,。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后，必須用 1%鹽酸乙醇分化，使細胞核過多結(jié)合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去,，再進行伊

紅染色,，才能保證細胞核不細胞漿染色的分明。

4,、返藍作用：

分化之后,，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色,；在堿性條件下處于藍色

離子狀態(tài),，呈藍色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色,，立即用水除去組織切 片上的酸而中止分化,，再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現(xiàn)藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用,。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍,，但所需時間較長。

產(chǎn)品組成：改良 Lillie-Mayer  蘇木素染色液 100ml 500ml RT 避 光

自備材料：

1,、酸性乙醇分化液

2,、藍化液，如稀氨水,、碳酸鋰溶液等

3,、系列乙醇

4、伊紅染色液

5,、4%多聚甲醛

操作步驟(僅供參考)：

(一)石蠟切片染色

1,、切片脫蠟至水

①□二甲苯作用 2 次，每次 5～10min,。

②□(可選)無水乙醇作用 2 次，每次 3～5min,。

③□95%的乙醇 3～5min

④□90%的乙醇           3～5min

⑤□80%的乙醇           3～5min

⑥□自來水或蒸餾水沖洗   1～3min

2,、染色

①改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液染色     5～8min

②自來水或蒸餾水沖洗                     5～10s

③(可選)鹽酸乙醇分化                      2～5s

④自來水沖洗                             20～30s

⑤(可選)藍化液返藍                        20～40s

⑥自來水沖洗                              30～60s 3～5min

⑦伊紅染色液染色                          3～5min

⑧□自來水沖洗                             1～5s

2、脫水,、透明,、封固

①□80%乙醇       10～20s

②□90%乙醇              10～20s

③□95%乙醇作用 2 次，每次 1～2min,。

④□無水乙醇作用 2 次,，每次 2～3min。

⑤□二甲苯透明 3 次,，每次 2～3min,。

⑥□中性樹脂封片。          

染色結(jié)果：細胞核呈藍色；細胞質(zhì),、肌纖維,、膠原纖維等呈深淺不一的紅色；角蛋白,、紅細

胞等呈明亮的橙紅色,。

(二)冰凍切片染色

1、乙謎醚-乙醇混合固定液        5～10s

2,、自來水沖洗                2～5s

3,、改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液滴染 1～2min(可加熱至 50℃)。

4,、自來水沖洗            2～5s

5,、(可選)鹽酸乙醇分化      2～5s

6、自來水沖洗             2～5s

7,、(可選)藍化液返藍         2～5s

8,、自來水沖洗               5～10s

9、伊紅染色液染色           2～5s

10,、自來水沖洗              1～2s

11,、80%的乙醇              1～2s

12 、95%的乙醇             1～2s

13,、無水乙醇                2～5s

14,、苯酚二甲苯(1:3)                 2～5s

15、二甲苯透明 3 次,，每次 2～5s,。

16、中性樹脂封片

染色結(jié)果：細胞核呈藍色,；細胞質(zhì),、纖維呈紅色。

(三)細胞染色

1,、4%多聚甲醛固定 10～20min,。

2、自來水沖洗 2 次,，每次 2min,。

3、蒸餾水沖洗 2 次,，每次 2min,。