產(chǎn)品簡介：

ACK 紅細(xì)胞裂解液(ACK Lysis Buffer)

在生物科研領(lǐng)域,，經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞,，去除紅細(xì)胞的方法有多種,，如  ACK   Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液,、Gey's Lysis Buffer,。ACK 紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)也稱 ACK Lysis Buffer，是一種從人,、鼠或其他哺乳動(dòng)物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液,，其主要有效成分為 NH4Cl。

ACK Lysis Buffer 經(jīng)過優(yōu)化配方,，在裂解無核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞,。對于裂解、去除有細(xì)胞核紅細(xì)胞,，例如鳥或禽

類的紅細(xì)胞,，效果不佳，裂解類似細(xì)胞時(shí),，不建議采用,。本裂解液經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過 ACK Lysis Buffer 處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng),、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測,。

產(chǎn)品組成：

ACK Lysis Buffer    100ml     500ml      4℃

自備材料：

1、 胰蛋白酶

2,、 離心機(jī)

3,、 PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液

操作步驟(僅供參考)：

(一)組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1,、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞

懸液,，離心棄上清,。

2、裂解: 加入 3～5 倍細(xì)胞沉淀體積的 ACK Lysis Buffer,，輕柔吹打混勻,，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,，亦可在室溫下操作,。

3、離心: 4℃,，400～500g 離心 5min,，棄紅色上清。如無低溫離心機(jī)，本步驟亦可在室溫下操作,。

4,、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 各一次,。

5,、洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,，輕柔混勻重懸

沉淀。4℃,，400～500g 離心 2～3min,，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作,。所加入的 PBS,、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上,。

6,、如有必要，重復(fù)上述步驟 5 一次,，共洗滌 1～2 次,。

7、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,，進(jìn)行計(jì)數(shù),、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(二)組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1,、制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞

懸液，離心棄上清,。

2,、裂解：加入細(xì)胞 5 倍細(xì)胞沉淀體積的 ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻,，裂解 1～2min,。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作,。

3,、加入 15～20ml PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

4,、離心：4℃,，400～500g 離心 5min，棄紅色上清,，本離心步驟亦可在室溫下操作,。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,，可以重復(fù)上述步驟 2～4 各一次,。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,，進(jìn)行計(jì)數(shù),、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(三)血液樣本的常規(guī)操作

1,、取新鮮抗凝血,，400～500g 離心 5min，棄上清,。

2,、裂解: 加入 6～10 倍細(xì)胞沉淀體積的 ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻,，裂解 1～5min,。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作,。(特別提醒：對于鼠的血液,，裂解 1～ 2min  已經(jīng)足夠，對于人的外周血,，宜延長裂解時(shí)間至  4～5min,，并且裂解過程中輕輕搖動(dòng) 以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)

3,、離心: 4℃,，400～500g 離心 5min，棄紅色上清,。如無低溫離心機(jī),，本步驟亦可在室溫下操作。

4,、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5,、洗滌: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS,、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀,。4℃,，400～500g 離心 2～3min，棄上清,，該離心步驟亦可在室溫下操作,。所加入的PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上,。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,，進(jìn)行計(jì)數(shù),、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意： 對于微量或少量的血液樣本,，可以不用第 1 步操作,，可直接加入 10 倍血液體積的 ACK Lysis Buffer 進(jìn)行第 2 步操作，并在 4℃或室溫裂解 4～15min,。對于鼠的血液,，裂解 4～5min 已經(jīng)足夠； 對于人的外周血,，宜延長裂解時(shí)間至 10min,，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。

(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1,、新鮮抗凝血中加入 10 倍體積的 ACK Lysis Buffer，輕輕吹打混勻,，裂解 4～15min,。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作,。（特別提醒：對于鼠的血液,，裂解 4～ 5min 已經(jīng)足夠，對于人的外周血,，宜延長裂解時(shí)間至 10min,，但通常不宜超過 15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。）

2,、加入 20～30ml PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,，輕柔混勻,。

3、400～500g 離心 5min,，棄紅色上清,。4℃離心效果更佳。

4,、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次,。

5,、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù),、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn),。

注意事項(xiàng)：

1、制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,，不一定要制備成單細(xì)胞懸液,。

2、后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng),，操作過程中應(yīng)注意無菌操作,，盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。

3,、離心步驟盡量在 4℃離心機(jī)上操作,。

4、常規(guī)步驟不快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心,，可以節(jié)省洗滌液  的用量,，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管,；快速步驟少了一次離心過程,，洗滌    效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管,。

5,、離心洗滌后，通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的檢測,。

6,、如果經(jīng)過 ACK Lysis Buffer 處理后的樣品后續(xù)用于總 RNA 的提取，在處理細(xì)胞時(shí)不必使用 DEPC 處理的溶液,，即無需在該操作中特意去除 RNase,。

7、為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

有效期： 12 個(gè)月有效,。