大鼠心肌細胞(H9c2)

貨號：RDCL-012

細胞介紹

B. Kimes and B. Brandt從源于BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆了H9c2(2-1)細胞株，它表現(xiàn)許多骨骼肌的特性,。這個細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管,，并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%,，融合發(fā)生得很快,。

細胞特性

1） 來源：心臟

2） 形態(tài)：成肌細胞，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶ 個/mL

4） 污染：支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細胞接受后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查是否漏液，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們,。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基,。

5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請及時與我們取得聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用,。

本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程,，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H，GIBCO,，貨號12800017,，添加NaHCO₃ 1.5g/L)，90%,；胎牛血清,，10%（注：血清要求為北美或澳洲血清）。（DMEM液體培養(yǎng)基：GIBCO,，11995-065）,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出,，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，先要消化處理并進行細胞計數(shù),。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，最后的重懸液使用血清,。懸浮細胞直接計數(shù)后離心,，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X10⁶個細胞凍存,。

注意事項：

1. 收到細胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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