雙熒光素酶報告基因檢測

實驗意義

1.可廣泛引用與miRNA的靶基因檢測,，可以判斷miRNA是否與靶基因結合,，也可以定量反映miRNA對目的基因的抑制作用。

2.轉錄因子(反式作用因子)存在DNA結合域,，可以與靶標啟動子中的特異序列(順式作用元件)進行共價結合,，從而調控基因的表達，雙熒光素酶報告系統(tǒng)是檢測這類轉錄因子與基因特異序列的重要手段,，是真核基因表達調控研究的常用方法,。

實驗原理及流程

雙熒光素酶是指螢火熒光素酶和海腎熒光素酶，螢火蟲熒光素酶呈黃綠色,，波長550-570nm, 海腎熒光素酶呈藍色,，波長為480nm。報告基因實驗是將靶標啟動子的特定片段插入熒光素酶表達序列的前方,，構建帶有靶標啟動子片段的雙報道基因質粒,，然后將待測的轉錄因子表達質粒與報告基因質粒共轉染HEK293細胞或者其他相關細胞系，如果轉錄因子能夠激活

啟動子,，則報告基因表達,，熒光素酶的表達量與轉錄因子作用強度成正比。加入熒光素酶底物即可根據(jù)熒光強度檢測轉錄因子與靶啟動子之間是否存在相互作用,。熒光素酶報告基因可構建在同一質?；蛘邩嫿閮蓚€質粒，即轉錄因子質粒與靶啟動子片段質粒,。

實驗完成周期及交付標準

實驗周期: 4-6周

交付標準: 雙熒光素酶報告基因檢測,、鑒定結果報告、分析報告,、實驗報告(試劑,、 耗材.實驗步驟)、原始數(shù)據(jù)等

需確認的信息

1.基因與啟動子信息

2.具體分許信息.

3.是否提供質粒?

參考文獻

[1] Miraglia E , Nylen, Frank, Johansson K,，et al. Entinostat up-regulates the CAMP gene encoding LL-37 via activation

of STAT3 and HIF-1a transcription factors[J]. Scientific Reports, 2016, 6:33274.

[2] Azimzadeh P,，Olson J A，Balenga N . Reporter gene assays for investigating GPCR signaling.[J]. Methods Cell Biol,

2017:89-99.

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