人粒細胞集落刺激因子（G-CSF）酶免ELISA試劑盒

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定人血清,，血漿,細胞上清及相關液體樣本中粒細胞集落刺激因子（G-CSF）含量,。

實驗原理：

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人粒細胞集落刺激因子（G-CSF）水平,。用純化的人粒細胞集落刺激因子（G-CSF）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入粒細胞集落刺激因子（G-CSF）,再與HRP標記的粒細胞集落刺激因子（G-CSF）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的粒細胞集落刺激因子（G-CSF）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人粒細胞集落刺激因子（G-CSF）濃度。

試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如出現沉淀，應再次離心,。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心,。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。

6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔,，在*、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為600ng/L，400ng/L ,，200ng/L，100ng/L,，50ng/L）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液50μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為6倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

注意事項：

1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。

2． 濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

3． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×6）,。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6． 底物請避光保存,。

7． 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9． 本試劑不同批號組分不得混用。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，    

在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的OD      

值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋      

倍數,；或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值      

代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上,。

2.批內與批見應分別小于9%和15%

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月

人白介素13(IL-13)ELISAKit
人白介素12(IL-12/P70)ELISAKit
人白介素12(IL-12/P40)ELISA Kit
人白介素11(IL-11)ELISA Kit
人白介素10(IL-10)ELISA Kit
人胰島素樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)ELISAKit
人胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISA Kit
人胰島素樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)ELISA Kit
人胰島素樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)ELISAKit
人胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISAKit
人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISAKit
人γ干擾素(IFN-γ)ELISA Kit
人細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA Kit
人肝細胞生長因子(HGF)ELISA Kit
人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISAKit
人膠質細胞系來源的神經營養(yǎng)因子(GDNF)ELISAKit
人粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA Kit
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