公司提供各種種屬,、各種系列ELISA檢測試劑盒,僅適用于科研,,不適用于臨床診斷,。公司提供免費(fèi)代測,更好的為您服務(wù),。詳情請或咨詢在線人員,。
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠腎損傷分子 -1(Kim-1)水平。用純化的大鼠腎損傷分子-1(Kim-1)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入腎損傷分子-1,再與 HRP標(biāo)記的 Kim-1抗體結(jié)合,,形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的腎損傷分子 -1(Kim-1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度( OD值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠腎損傷分子 -1(Kim-1)濃度.
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收
集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心
20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再
次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存
過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000
轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,
細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心
20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次
離心
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保
存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻
漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。分裝后
一份待檢測,其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬
上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
檢測范圍:
10ng/L -100ng/L
保存條件及有效期:
1 2-8℃。
2 6個(gè)月