公司提供各種種屬,、各種系列ELISA檢測試劑盒,僅適用于科研,,不適用于臨床診斷,。公司提供免費代測,更好的為您服務(wù),。詳情請或咨詢在線人員,。
實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠視黃醇結(jié)合蛋白 4(RBP-4)水平。用純化的大鼠 RBP-4抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4),再與 HRP標記的 RBP-4抗體結(jié)合,,形成抗體 -抗原-酶標抗體復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度( OD值),,通過標準曲線計算樣品中大鼠視黃醇結(jié)合蛋白 4(RBP-4)濃度,。
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收
集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心
20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再
次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,保存
過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000
轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,
細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心
20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次
離心
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保
存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻
漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。分裝后
一份待檢測,,其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬
上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
檢測范圍:
50μg/L -1000μg/L
保存條件及有效期:
1 2-8℃,。
2 6個月