公司提供各種種屬,、各種系列ELISA檢測(cè)試劑盒,,僅適用于科研,不適用于臨床診斷,。公司提供免費(fèi)代測(cè),,更好的為您服務(wù)。詳情請(qǐng)或咨詢?cè)诰€人員,。
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子 1(TIMP-1)水平,。用純化的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子 1(TIMP-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子 1(TIMP-1)抗原,,再與 HRP標(biāo)記的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子 1(TIMP-1)抗體結(jié)合,,形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 TIMP-1呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測(cè)定吸光度( OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子 1(TIMP-1)濃度,。
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收
集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心
20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,保存
過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000
轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,
細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20
分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保
存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻
漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一
份待檢測(cè),,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
檢測(cè)范圍:
300pg/ml-8000pg/ml
保存條件及有效期:
1 2-8℃,。
2 6個(gè)月