實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠基質(zhì)衍生因子 -1a(SDF-1a)水平,。用純化的大鼠基質(zhì)衍生因子 -1a(SDF-1a)抗體包被微孔板,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入基質(zhì)衍生因子 -1a(SDF-1a),,再與 HRP標(biāo)記的基質(zhì)衍生因子 -1a(SDF-1a)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)衍生因子 -1a(SDF-1a)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度( OD值),,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠基質(zhì)衍生因子 -1a(SDF-1a)濃度。
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保
存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右
(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無(wú)菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過(guò)程中如有沉
淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔
細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左
右,。通過(guò)反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)
收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本
融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離
心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),,其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)
,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性,。
檢測(cè)范圍:
0ng/L -350ng/L
保存條件及有效期:
1 2-8℃。
2 6個(gè)月