ELISA直接法測長葉車前花葉病毒（RMV）含量實驗步驟

1. 將不同濃度的待檢測RMV溶液作為樣品液,，在測定板每孔各加250ul,至冰箱（4℃）中孵育過一夜,。
2. 孵育后,，去除孔穴內(nèi)抗原溶液,，用PBS-Tween20溶液緩緩沖洗孔穴3次,，每次3min,，然后去凈洗滌液,。
3. 每孔穴加250ulRMV的酶標記抗體溶液（用1%牛血清白蛋白的PBS- ween20稀釋）在恒溫箱（37℃）里孵育3-6h,或6℃下過一夜,。
4. 去除孔穴酶標記抗體溶液,，用PBS-Tween20溶液緩緩沖洗3次每次3min，然后去凈洗滌液,。
5. 每孔穴加入新鮮配備的底物溶液250ul,室溫放置0.5h,，或者放置出現(xiàn)黃色。
6. 加入50ul3N NaOH,，終止反應(yīng),。
7. 對每孔穴的黃色溶液，測定449nm波長處的吸光值,。

討論

1. 如該聚苯乙烯塑料微量反應(yīng)板*次使用,，應(yīng)分別用標準濃度的RMV溶液、RMV的抗血清及RMV與它的IgG形成的免疫結(jié)合物,，進行期盼滴定法來測該聚苯乙烯塑料微量反應(yīng)板對RMV抗原和它的抗體的吸附能力,。
2. 在正式測樣品前，用0.1mol/L pH9.6碳酸鹽緩沖液配置各種標準濃度的RMV溶液,，依照實驗步驟測定RMV各種標準濃度的A449nm值,，以病毒標準濃度為橫坐標，A449nm值為縱坐標繪制標準曲線,，由此可以測出RMV包被的濃度,。
3. 測出原始底物的吸光值，以便核準數(shù)據(jù),。
4. 對照標準曲線,，就可算出樣品液中RMV的含量。
5. 如無牛血清白蛋白,，可用0.1%白明膠代替,。
6. 對于不穩(wěn)定的病毒，用中性緩沖液稀釋,。
7. 如有ELISA測定儀,，可快速測定。

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