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ELISA分析儀器
ELISA試劑技術(shù)20世紀80年代引入中國,,現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用,。與之相關(guān)的分析儀器也得到了快速發(fā)展,,我國先后出現(xiàn)了十余家酶標儀,、洗板機生產(chǎn)廠商,,在中國市場上與眾多的進口酶標儀器進行緊張競爭,。下面分三個方面對ELISA中有關(guān)儀器及其在中國的應(yīng)用作一簡要介紹,。
分離式酶聯(lián)免疫儀器
分離式酶聯(lián)免疫儀器主要有酶標儀、洗板機,。在血清離心之后,,經(jīng)過加樣、洗板,、孵育等過程,,zui后通過吸光度判定結(jié)果。ELISA實驗在國內(nèi)主要用于定性檢驗,,故目前的分離式儀器基本上可以滿足,。
酶標儀本質(zhì)上是一臺于微孔板的、可見光范圍的光電比色計,。在ELISA實驗中,,酶標儀是測定各微孔中試樣的吸光度的關(guān)鍵儀器,,對試驗結(jié)果的判定有直接影響,是實驗室*的重要儀器之一,。隨著ELISA技術(shù)的普及,,酶標儀得到了很大發(fā)展,產(chǎn)品種類齊全,,型號多樣,,各有特色。目前國內(nèi)市場上銷售的酶標儀已*擺脫原來的單孔測量方式,,整板測量,、定性定量計算、存儲,、多種報告格式,、濾光片自動轉(zhuǎn)換等已成為基本的、*的功能,,各種新推出的酶標儀性能日益完善,,功能不斷擴充。具體有:
(1) 測量高速化 從目前不斷推出的酶標儀趨勢來看,,整板測量速度均在10s以內(nèi),,這有利于防止測量過程中各微孔吸光度的微小變化,盡可能克服環(huán)境對結(jié)果的影響,,同時可以滿足動力測量的要求,,測量速度在20s以上的儀器將處于不利于地位,。我國現(xiàn)生產(chǎn)的酶標儀,,測量整板速度一般為25s,產(chǎn)品更新周期較長。
(2) 寬吸光度范圍 盡管酶標儀A=0-2.5的吸光度范圍*可以滿足實驗的要求,,但國外新推出的儀器都擴寬了早期型號的吸光度范圍,,較的酶標儀其線性范圍可以達到A=4.0,并且保持很好的精密度,,如BIORAD公司的Benchmark,在400-750nm,、A=0-4.0時其重復(fù)性與線性均不大于3.5%。又如LABYSTEMS公司的Multi-skan Ascent,其吸光度讀數(shù)范圍達A=0-4.0,,在A=3.0-4.0范圍,,其線性不超過2%, RSD小于1.0%。
(3) 擴展到紫外 增加紫外濾光片幾乎是廠商的共同選擇,。由于各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉(zhuǎn)換的機構(gòu),,可以同時安裝6-8片濾光片,擴展紫外功能相對容易,,一般都增加340nm濾光片,。
(4) 具有孵育功能 可以自動,、控制反應(yīng)溫度,使微孔板的孵育過程在儀器內(nèi)部完成,,降低外界干擾,,簡化操作步驟。如BIORAD公司的Benchmark,芬蘭LABSYSTEMS公司的Multiskan Ascent,BIOTCK公司的EIX808等,。
(5) 具有動力學(xué)檢測功能 常規(guī)ELISA是一種終點法測量實驗,,測量前需要加入終止液來抑制酶免反應(yīng)的進行,通過吸光度的大小來計算待測物質(zhì)的濃度,,動力學(xué)方法是通過測定反應(yīng)過程中吸光度的變化速率來計算相應(yīng)的待測物質(zhì)的含量的,,酶標儀的測量速度加快后,只要增加相應(yīng)的軟件,,就可以使用酶標儀完成某些生化指標的動力學(xué)測量,。
洗板機是ELISA試驗保證洗滌效果、進而保證實驗質(zhì)量的重要儀器,,洗板機的作用已不再是簡單的代替人的手工勞動的自動化裝置,。目前國內(nèi)的洗板機除提供常規(guī)的設(shè)備清洗次數(shù)、清洗條數(shù),、浸泡時間等基本功能之外,,還根據(jù)用戶的需要分別增加了底部沖洗、兩點吸液,、板式/條式洗板,、震蕩、位置調(diào)節(jié)及自動清洗管路,、自動換液存儲多種洗板程序等功能,,清洗殘留量由原來的5-6UL/孔減小到2UL/孔,有的洗板機允許用戶對洗板過程的每一步的流量,、時間,、位置等進行詳盡的設(shè)定。生產(chǎn)廠商根據(jù)各自對洗板技術(shù)的研究,,努力提高儀器可靠性與自動化程度,,同時為用戶提供一個*的、完善的洗滌環(huán)境,。國內(nèi)洗板機就洗板效果,、產(chǎn)品可靠性等主要指標已達到進口以前的水平,與進口儀器相比,,其價格,、售后服務(wù)占一定優(yōu)勢,主要差距是無定量加液,。
組合式的酶聯(lián)免疫儀器
組合式的酶聯(lián)免疫儀器分三類:全自動酶聯(lián)免疫系統(tǒng),、自動樣品處理系統(tǒng),、流水線作業(yè)式組合系統(tǒng)。前兩者主要用于各大血站,、醫(yī)院,,后者主要用于試劑生產(chǎn)廠商。
全自動酶聯(lián)免疫系統(tǒng)是將ELISA試驗中的各個步驟,,從加樣,、孵育、洗滌,、震蕩,、閉塞到定性或定量分析、報告存儲與打印功能全部集成在一臺儀器中,,由儀器按用戶事先設(shè)計的程序自動進行,。HAMILTON公司的FAME(世界上*臺自動板式ELISA系統(tǒng))、BIORAD公司的CAA,、奧斯邦公司的AMP,、TECAN公司的Minilyser、ORGANO公司的TEKTIME,、意大利S.P.A. DIVISION STRUMENTI的PersonaiLAB等全自動酶聯(lián)免疫系統(tǒng)已先后進入國內(nèi)市場。近兩年新進入中國市場還有DYNDRX,、公司的DSX,、 阿克蘇公司的Flextk2、BIOASIA代理的TRITURUS等,。全自動酶聯(lián)免疫系統(tǒng)的出現(xiàn)滿足了各大醫(yī)院,、血站大批量重復(fù)檢驗的要求,提高了這些單位的檢查檢驗效率與實驗水平,,有效控制了大批量檢驗中極有可能出現(xiàn)的人工操作失誤,,有利于ELISA實驗的質(zhì)量保證與提高,,其國內(nèi)市場穩(wěn)步增長。
自動樣品處理系統(tǒng)主要用于完成ELISA實驗中的繁瑣無味,、人工容易出錯的加樣,、稀釋滴定、孵育,、洗滌等步驟,完成之后再由酶標儀判定結(jié)果,。使用自動樣品處理系統(tǒng)利用原有的酶標儀,,既節(jié)約資金,,又實現(xiàn)了實驗過程的自動化,,是一種很經(jīng)濟的方案。
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