人巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（M-CSFR）ELISA Kit實(shí)驗(yàn)原理

本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人的血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（M-CSFR）的含量,。

實(shí)驗(yàn)原理：

   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（M-CSFR）水平。用純化的人巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（M-CSFR）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（M-CSFR），再與HRP標(biāo)記的巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（M-CSFR）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（M-CSFR）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（M-CSFR）濃度,。

樣本處理及要求：

1.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用,。

2.尿液：用無(wú)菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實(shí)行,。

3.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。

4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

5.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次離心,。

注意事項(xiàng)：

a .試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

B . 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

C .各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

D .請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

E .封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

如有需要請(qǐng)索要說(shuō)明書(shū)：www.021yjsw.com