*0感受態(tài)細胞實驗步驟                   

*0 Competent Cell
*0感受態(tài)細胞
目錄號：YJ0807

保存條件：-80℃保存。

組分說明

                   Cat. No.                         YJ0807B
                   Size                             10×100 μl
                   *0 Competent Cell             10×100 μl
                   Control DNA pUC19,，0.1 ng/μl         10 μl

產(chǎn)品簡介

　　本產(chǎn)品是大腸桿菌*0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于  DNA的
熱擊轉(zhuǎn)化,。*0是一種常用于質(zhì)?？寺〉木辏洇?0lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體
編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補,，可用于藍白斑篩選,。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)
化效率可達10 ⁸  ,，適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復制,。

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途 

    注意事項

    1．感受態(tài)細胞一定要用干冰運輸,。感受態(tài)細胞應(yīng)在  -80℃下保存,，不可反復凍融和放
       置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率,。
    2．轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作,。
    3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用,。

    操作步驟

    1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中,。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)
       實際情況分裝使用,。
       以下實驗以50 μl感受態(tài)細胞為例,。
    2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量
       的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和）,，用移液器輕
       輕吹打混勻,，冰浴30分鐘。
    3．42℃熱擊45秒,，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,，冰上靜置2-3分鐘。
    4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素）,，混勻后置于37℃
       搖床,，150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇。
    5．根據(jù)實驗需求,，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,，加到含相應(yīng)抗生素的   SOC或LB固體
       瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,，將平板置于37℃直至液體被吸收,，
       倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時,。

       注意：1）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整,。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板,；若
       轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預計的克隆數(shù)較少,，可通過離心（4,000

       rpm,，2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中,。

       2）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
       3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存,，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

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