夾心法測抗原方法和包被條件

在夾心ELISA法中可用棋盤滴定法同時選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的工作濃度,， 1：抗體免疫球蛋白用包被緩沖液稀釋至蛋白濃度為10UG/ML"0.1UG/ML,FB分別在ELISABAN板上進(jìn)行包被,，每一濃度包被三個縱行,，洗,。

2在一個橫行各包被孔中加入強陽性抗原液,，另一橫行加入弱陽性抗原液,，第三橫行加入陰性對照液,，腐育,，洗條,。

3將酶標(biāo)抗體用稀釋液稀釋成三個濃度

分別加入每一包被濃度的一個縱行中，孵育,，洗滌,。

4加底物顯色，加酸終止反應(yīng)后,，讀取A值,。

5以強陽性抗原液的A值在0.8左右，陰性參考液的A值小于0.1的條件作為zui適條件,，據(jù)此選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的工作濃度,。包被緩沖液的PH和離子強度對吸附也有影響。包被蛋白質(zhì)的緩沖溶液的PH宜片5堿性,，在PH=7~10都可以達(dá)到較好的吸附效果,，如常用的緩沖溶液有碳酸鹽緩沖溶液（PH=9.6）·                           

 緩沖液還影響某些方法的敏感性，在用類脂和病毒抗原包被時,，有必要加入脫氧膽酸鈉,，將包被的抗體F 段部分變性可以增加敏感性。

有些單克隆抗體很難吸附固相,，需要試用不同的緩沖液及緩沖液的濃度與PH,，另外，還要注意包被的條件和包被抗原與抗體的濃度,。