大鼠C肽（C-P）ELISA說明書

本試劑盒用于測定大鼠血清,，血漿及相關液體樣本中C肽（C-P）含量,。

標本處理及要求

 1．血清,、血漿標本可直接測定,；

2．尿液,、腦脊液,、腹腔液：2000-3000轉/分離心10分鐘后,，取上清液待測。

3．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

4．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融。

試劑盒組成

自備物品

1 ,、 37 ℃ 恒溫箱

2 ,、 標準規(guī)格酶標儀

3 ,、 精密移液器及一次性吸頭

4 、 蒸餾水

5 ,、 一次性試管

6 、 吸水紙

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,，在*,、第二孔中分別加標

準品 100μl，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后從*孔,、第二

孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，

混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔

中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各

取 50μl 分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混

勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，

濃度分別為180ng/L,，120ng/L ,，60ng/L，30ng/L,， 15ng/L）,。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣

品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣

品zui終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混

勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。     

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此

重復 5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止

液后 15分鐘以內進行,。

計算

    以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的

OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標

準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，

即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 嚴格按說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

6．本試劑不同批號組分不得混用,。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．底物請避光保存。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6個月

大鼠C-反應蛋白（CRP）ELISA試劑盒說明書