人過氧化脂質(zhì)（LPO）酶聯(lián)免疫實驗原理

本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中過氧化脂質(zhì)（LPO）的含量,。

過氧化脂質(zhì)注意事項：

1．  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2．  濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．  各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4．  請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×6）,。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．  底物請避光保存,。

7．  嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．  所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．  本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

實驗原理：

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人過氧化脂質(zhì)（LPO）水平。用純化的人過氧化脂質(zhì)（LPO）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入過氧化脂質(zhì)（LPO）,，再與HRP標記的過氧化脂質(zhì)（LPO）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的過氧化脂質(zhì)（LPO）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人過氧化脂質(zhì)（LPO）濃度。

試劑盒組成：

操作步驟（LPO）：

1.         標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔,，在*,、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為600 nmol/L,，400 nmol/L ,，200 nmol/L，100 nmol/L,，50nmol/L）。

2.         加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液50μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為6倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。

5.         洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3,。

8.         洗滌：操作同5,。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.     測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，   

在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋      

倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值      

代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。                  

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.92以上。

2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和15%

檢測范圍：                                             

24nmol/L -800nmol/L

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月