植物1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定植物組織，細胞及其它相關(guān)樣本中植物1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)活性,。

實驗原理：

   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中植物1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)水平,。用純化的植物1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS),，再與HRP標記的1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中植物1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)活性濃度,。

試劑盒組成：

標本要求： 

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟：

• 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,，在、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為150U/L,，100U/L ,，50U/L， 25U/L,， 12.5U/L）,。
• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
• 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5,。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

注意事項：

• 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
• 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
• 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間建議控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
• 請每次測定的同時做標準曲線，建議做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
• 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
• 底物請避光保存,。
• 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
• 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
• 本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，    

在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD      

值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋      

倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值      

代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。                   （此圖僅供參考）

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上,。

2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和11%

檢測范圍：                                              

6U/L -200U/L

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6個月

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