瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒

Midi Purification Kit

保存條件：本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 18 個(gè)月不影響使用效果,。

產(chǎn)品介紹：

 在高離序鹽存在的情況下,，DNA片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上,，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,，漂洗液將引物,、核苷酸,、蛋白,、酶等雜質(zhì)去除,，后用低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜,，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好,?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2. 使用了溶膠液,，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化那鈉和高氯酸鹽,，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng),。

3. 溶膠液調(diào)制成為了黃顏色,，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè) pH 值變化從而達(dá)到理想結(jié)合效果，大大提高回收效率,。

注意事項(xiàng):

1. 所有的溶液應(yīng)該是澄清的,，如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀，此時(shí)不應(yīng)該直接使用,，可在 37℃水浴加熱幾分鐘,，即可恢復(fù)

澄清。使用前應(yīng)該恢復(fù)到室溫,。

2. 儲(chǔ)存于低溫（4℃或者-20℃）會(huì)造成溶液沉淀,，影響使用效果，因此運(yùn)輸和儲(chǔ)存均在室溫下（15℃-25℃）進(jìn)行,。

3. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā),、氧化、pH 值變化,，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子,。

4. 溶膠液中含有刺激性化合物,，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚,，眼睛和衣服,。若沾染皮膚、眼睛時(shí),，要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5. 回收純化的DNA片段一般在100bp到40kb之間,，過長(zhǎng),、過短片段的回收效率降低。

6. 回收DNA的量和起始DNA的量,、洗脫體積,、DNA片斷大小有關(guān)。一般1-20μg,， 100bp-5kb的DNA片段,，回收率可高達(dá)85%-95%。

7. 切膠回收時(shí),，紫外燈觀察對(duì)DNA片段有損壞作用,，應(yīng)該盡可能使用能量低的長(zhǎng)波紫外線，并且盡可能的縮短紫外線下處理的時(shí)間,。

8. pH值≤7.5時(shí),，吸附膜吸附DNA的效率高。如果切下來的凝膠中含有電泳緩沖液太多,，造成溶膠后溶膠液pH偏高,，會(huì)導(dǎo)致回收率降低。溶膠后,，如果溶膠液依舊保持黃色,，說明pH正常；如果變成橘紅色或者淡紫色,，說明pH偏高,，可在膠充分溶解后加5-10μl3M醋酸鈉（pH5.2）將pH值調(diào)到5-7（黃色）。

9. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,， 不影響下游酶切,、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,， 但應(yīng)該確保pH大于7.5,， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫,，DNA片段應(yīng)該保存在-20℃,。DNA片段如果需要長(zhǎng)期保存,，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA,， pH 8.0）,，但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋,。

自備試劑：無水乙醇

提示：次使用前請(qǐng)先在漂洗液 WB 中加入量無水乙醇,，加入后請(qǐng)及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!

1. 在長(zhǎng)波紫外燈下,，用干凈刀片將所需回收的 DNA 條帶切下,，盡量切除不含 DNA 的凝膠，得到凝膠體積越小越好,。

2. 將切下的含有 DNA 條帶凝膠放入 1.5ml 離心管,，稱重。

3. 加 3 倍體積溶膠液 DD,。（凝膠重為 100mg,，則加入 300μl 溶膠液）如果凝膠濃度大于 2％，應(yīng)加入 6 倍體積溶膠液,。

4.56℃水浴放置 10min（或直至膠*溶解）,。每 2-3min 渦旋震蕩一次加速溶解。

5. 可選,：每 100mg 初的凝膠重量加入 150μl 的異丙醇,，震蕩混勻,。

6. 將上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中（吸附柱放入收集管中），室溫放置 1min,，12,000rpm 離心 30-60sec,，倒掉收集管中的廢液。

7. 加入 500μl 漂洗液 WB  （請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!）,，12,000rpm  離心 30sec,，棄掉廢液。

8. 重復(fù)操作步驟 7,。

9. 將吸附柱 EC 放回空收集管中,，12,000rpm 離心 2min，盡量去除漂洗液,，以免漂洗液中殘留的乙醇抑制下游反應(yīng),。

10 取出吸附柱 EC，放入一個(gè)干凈的離心管中,，室溫放置數(shù)分鐘,。

11.在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好），室溫放置 2min,，12,000rpm  離心

1min,。如果需要較多量 DNA,，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，離心 1min,。(注意：洗脫體積不應(yīng)小于 30μl,，體積過少影響回收效率)

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