本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于檢測人血清,，血漿, 細胞培養(yǎng)液及相關(guān)液體樣本中丁型肝炎IgG(HDV IgG)水平,，感染人的血液學診斷。
  實驗原理：
  本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標本中人丁型肝炎IgG(HDV IgG),。用純化的人丁型肝炎IgG(HDV IgG)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，可與樣品中丁型肝炎IgG(HDV IgG)相結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的丁型肝炎IgG(HDV IgG)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中人丁型肝炎IgG(HDV IgG)的存在與否,。  試劑盒組成：

樣本處理及要求：
  1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心,。
  2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心,。
  3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
  4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。
  5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。
  6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.
  7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
  操作步驟：
  1. 編號：將樣品對應微孔按序編號,，每板應設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔,、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）
  2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,，
  3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
  4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
  6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。 
  7. 溫育：操作同3。
  8. 洗滌：操作同5,。
  9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
  10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
  11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
  結(jié)果判定：
  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為丁型肝炎IgG(HDV IgG)陰性
  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為丁型肝炎IgG(HDV IgG)陽性
  注意事項
  1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用,。
  2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。
  3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
  4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
  5．底物請避光保存,。
  6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
  7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸,，使用時必須注意安全,。
  保存條件及有效期
  1．試劑盒保存：；2-8℃,。
  2．有效期：6個月

人胚腎細胞（293T）培養(yǎng)說明書
人甲狀腺乳頭狀癌細胞（papillary thyroid carcinoma, PTC）培養(yǎng)說明書