C166 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞

Product Format: a T25 flask

Culture Properties：貼壁

Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components  

Operation steps for cell culture

• 吸走用于培養(yǎng)基,，加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞,；
• 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細(xì)胞表面,，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化,；
  （細(xì)胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長,。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,，可以輕輕吹下時(shí)即可終止，禁止消化到細(xì)胞*漂浮,。混勻細(xì)胞時(shí)盡量輕柔,，不要吹出大量氣泡,。）
• 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻,；
• 將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min,，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),；

傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一,，具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代,，生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代,。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h,，-80過夜后液氮保存,。

Tips：

• 細(xì)胞經(jīng)過運(yùn)輸后，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰ZHUANG死亡破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化,，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清,。加5ml PBS重懸細(xì)胞,，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶,。第二次PBS重懸是為了去除碎片,，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多,，建議PBS多洗幾次。
• 細(xì)胞生長不均時(shí),，可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代,。
• 細(xì)胞生長緩慢時(shí)，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（zui高不超過20%）,，也可以根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài),，選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),。

不同細(xì)胞貼壁性差異比較大，所以消化時(shí)間差別較大,，20s-10min均有可能,，具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準(zhǔn),，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞*漂浮,。

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：