羥自由基清除能力測定試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義

羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì),、核酸,、脂類等生物分子,，造成細胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病,。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一,，在抗氧化類

保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。

測定原理

H₂O₂/ Fe²⁺通過Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基,，將鄰二氮菲- Fe²⁺水溶液中 Fe²⁺氧化為Fe³⁺，導(dǎo)致 536nm吸光度下降,，樣品對536nm吸光度下降速率的抑制程度,，反映了樣品清除羥自由基的能力。

自備實驗用品

可見分光光度計,、恒溫水浴鍋,、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 50 mL×1 瓶,，4℃保存,。

試劑一：液體 8 mL×1 瓶，4℃避光保存,。

試劑二：液體 20 mL×1 瓶,，4℃保存。

試劑三：液體 5 mL×1 瓶,，4℃保存,。

試劑四：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存,。

樣品的制備

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，

加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g,，4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

2. 血清,、果汁等液體樣品可直接測定。

3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度,，如 5 mg/mL,。

操作步驟

注意：空白管和標準管只需測定一次,。

計算公式

羥自由基清除率 D% =（OD測定管- OD對照管）÷（OD空白管-OD對照管）×100%

注意事項

為了比較不同樣品羥自由基清除能力,，對于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清,、組織勻漿,、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度,。

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