BMSC/hBMSCs 人骨髓間充質干細胞

Catalogue No.: C408

Product Format: a T25 flask

Culture Properties：貼壁

Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components  

Operation steps for cell culture

• 吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞,；
• 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表面,，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化,；
  （細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài),，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長,。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止,，禁止消化到細胞*漂浮,。混勻細胞時盡量輕柔,，不要吹出大量氣泡,。）
• 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細胞混勻,；
• 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min,，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一,，具體傳代比例視細胞生長速度而定,，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代,。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min,，-20度2h，-80過夜后液氮保存,。

Tips：

• 細胞經(jīng)過運輸后,，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞si亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象,。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞,，900-1000rpm(約150g)離心3min,，棄上清。加5ml PBS重懸細胞,，再900-1000rpm(約150g)離心3min,，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片,，如果平時碎片比較少,，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多,，建議PBS多洗幾次,。
• 細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代,。
• 細胞生長緩慢時,，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（zui高不超過20%），也可以根據(jù)細胞生長狀態(tài),，選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),。
• 不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大,，20s-10min均有可能,，具體以細胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準,，嚴禁消化到細胞*漂浮,。客戶消化過度導致細胞死亡、漂浮,、生長緩慢,，不提供免費售后服務,。
• 試劑盒免費代測和承接實驗