MSF 小鼠皮膚成纖維細胞

Catalogue No.: C1553

Product Format: a T25 flask

Culture Properties：貼壁

Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components  

Operation steps for cell culture

• 吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞；
• 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表面,，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；
  （細胞對于消化比較敏感,，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài),，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落,，可以輕輕吹下時即可終止,，禁止消化到細胞*漂浮?；靹蚣毎麜r盡量輕柔,，不要吹出大量氣泡。）
• 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,，輕輕吹下細胞混勻,；
• 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清,，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定,，大部分細胞適用1:3-1:4傳代,，生長較慢的細胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min,，-20度2h,，-80過夜后液氮保存。

Tips：

• 細胞經過運輸后,，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞的死亡破碎形成碎片,，是正常現象,。貼壁細胞可以消化,，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約150g)離心3min,，棄上清,。加5ml PBS重懸細胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min,，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶,。第二次PBS重懸是為了去除碎片,，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多,，建議PBS多洗幾次。
• 細胞生長不均時,，可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代,。
• 細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（不超過20%）,，也可以根據細胞生長狀態(tài),，選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

不同細胞貼壁性差異比較大,，所以消化時間差別較大,，20s-10min均有可能，具體以細胞消化到相互分離但未脫落,，并可以輕輕吹下為準,，嚴禁消化到細胞*漂浮。