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2715次免疫膠體金銀細(xì)胞化學(xué)染色的固定劑選擇
免疫膠體金銀染色和其它免疫細(xì)胞化學(xué)方法一樣,，要想得到好的染色效果，關(guān)鍵取決于標(biāo)本處理是否合適,，只有使抗原性及組織結(jié)構(gòu)保存的好,，才能使以后的染色成功成為可能，其次要用高特異性和價(jià)的一抗,，選擇合適的稀釋度,。由于免疫組化方法廣泛應(yīng)用于不同的生物學(xué)科，所要檢出的抗原種類繁多,，性質(zhì)也各不相同,。因此，不可能有一種適用于所有抗原的固定劑,，而是根據(jù)不同的抗原性質(zhì)區(qū)別對(duì)待,。根據(jù)我們使用的固定劑介紹如下，供參考,。
一,、固定劑的選擇及固定時(shí)間（詳見表5-9）
（1）Karovsky's 液pH7.3。
?。?）PAP液（Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative）
配制見附錄一,。
表5-9 各種抗原固定劑的選擇及固定時(shí)間
| 待檢抗原 | 固定劑的種類 | 固定時(shí)間 |
| 蛋白質(zhì) | ||
| 酶 | 冰凍切片不固定，或用95%乙醇,，B5固定液 | 10 min |
| 激素 | 冰凍切片,，涂片，印片,，不固定或丙酮,，甲 | 10 min |
| 醇，乙醇,，PEG固定,，B5固定液固定 | 4℃30 min | |
| 免疫球蛋白 | 中性福爾馬林，四氯化碳（1%甲醛） | 30 min |
| 白蛋白 | 95%乙醇含1～5%冰醋酸 | 30 min |
| 纖維蛋白元 | 同上 | 30 min |
| 病毒 | 丙酮,，100%乙醇,，甲醇，乙醚 | 30 min |
| 糖蛋白 | PLP,，丙酮 | 30 min |
| 脂質(zhì)Forssman | 中性福爾馬林 | 20 min |
| 抗原 | 2.5%硫代硫酸鈉,，冰凍切片不固定 | 20 min |
| 免疫電鏡 | PLP，戊二醛,，戊二醛—多聚甲醛（Kacnovsky’s 液pH7.3）PEG,、ECD-G等 | 30min |
二、切片的處理與粘附,。
免疫組化染色過程較長,，洗的次數(shù)很多，而且均在振蕩洗滌,，抗原片附貼不緊,，往往在zui后的時(shí)刻，還沒有等顯色就會(huì)脫落導(dǎo)致前功盡棄,，這個(gè)環(huán)節(jié) 雖小卻會(huì)影響大局,，因此，為了保證切片染色成功必須把切片處理好,，解除掉片的后顧之憂
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