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化學(xué)發(fā)光定氮儀常用的化學(xué)發(fā)光技術(shù)

時間:2014/4/16閱讀:1510
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電化學(xué)發(fā)光是通過對電極施加一定的電壓進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)光,,化學(xué)發(fā)光定氮儀通過測量化學(xué)發(fā)光光譜和強(qiáng)度來測定物質(zhì)含量的一種痕量分析方法,。它將電分析化學(xué)手段和化學(xué)發(fā)光方法相結(jié)合,具有*的優(yōu)點,,如重現(xiàn)性和靈敏度進(jìn)一步提高,,在多種組份同時存在時,可施加不同波形,、不同電壓的信號進(jìn)行選擇性測量等,,是潛在的分析手段之一。

化學(xué)發(fā)光免疫分析是以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標(biāo)記免疫分析法,,具有靈敏度高,、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡單,、操作方便,、分析速度快和容易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。魯米諾,、異魯米諾及其衍生物,、吖啶酯衍生物、辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中使用zui多的標(biāo)記物,。

微粒子化學(xué)發(fā)光是化學(xué)發(fā)光免疫分析的特殊形式,,是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù),同時應(yīng)用了磁性微珠做固相載體,,增加了吸附面積,,使抗原抗體zui大限度的結(jié)合。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰).苯基.1,,2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,,ALP)的作用下,迅速去磷酸酶,,生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-,,進(jìn)而產(chǎn)生激發(fā)態(tài)產(chǎn)物,當(dāng)其躍遷回到基態(tài)時產(chǎn)生光子,。微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)所需標(biāo)本量極少,,孵育時間大大縮減,同時因其選擇性吸附抗原,,從而提高了特異性,、靈敏性,使測定結(jié)果準(zhǔn)確,、可靠,,并減少污染。

化學(xué)發(fā)光生物傳感器是通過非創(chuàng)傷或非損傷性的辦法,連續(xù),、實時,、動態(tài)地檢測生物體內(nèi)的某一種或幾種物質(zhì)濃度的技術(shù)。該技術(shù)以化學(xué)發(fā)光作為換能器,,不但繼承了化學(xué)發(fā)光高靈敏度的優(yōu)點,,而且大大提高了化學(xué)發(fā)光的選擇性。按照所固定化的生物組分的種類,,可以將化學(xué)發(fā)光生物傳感器分為酶傳感器,、免疫傳感器、組織傳感器,、核酸傳感器及微生物傳感器等,。特別是化學(xué)發(fā)光免疫傳感器是將具有分子識別作用的抗原或抗體以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ɑ瞥桑Y(jié)合了化學(xué)發(fā)光高靈敏度和抗原抗體特異性結(jié)合的高度專一性以及無污染等特點,,是替代放射免疫分析的重要分析工具,,已日益受到重視。

化學(xué)發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒,、細(xì)菌和原蟲的DNA,。以魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光檢測體系的核酸探針主要有兩種形式,一種是用生物素標(biāo)記探針,,雜交后經(jīng)過分離,再以過氧化物酶標(biāo)記的親和素與生物素結(jié)合,,加入魯米諾和增強(qiáng)劑后測發(fā)光,。另一種是以過氧化物酶直接標(biāo)記探針,用增強(qiáng)的魯米諾檢測發(fā)光,。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來標(biāo)記,,吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時光,而AP以AMPPD作為發(fā)光底物,,其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點,,發(fā)光時間可長達(dá)幾天,既可用發(fā)光儀也能用簡單的感光膠片檢測,。另外,,AP-AMPPD發(fā)光體系具有非常高的靈敏度,無論是固相還是液相檢測,,對標(biāo)記物堿性磷酸酶的檢測限可達(dá)10-21(<1000 AP分子),,是目前zui靈敏的核酸測定方法之一,已用于檢測B19微小病毒DNA,、人乳頭瘤病毒DNA(HPV).巨細(xì)胞病毒DNA(CMV),,并在DNA測序中有很好的應(yīng)用。


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