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β-半乳糖苷酶染色試劑盒

產(chǎn)品說明：
(β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時 SA-β-Gal (senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細胞的衰老檢測,，也可以用于組織切片的衰老檢測,。β-半乳糖苷酶試劑盒以 X-Gal 為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產(chǎn)物,，光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細胞,，對衰老前的細胞(presenescent cells),、靜止期細胞(quiescent cells)、永生細胞(immortal cells)或腫瘤細胞等不會染色,。對于組織切片或組織塊,，可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定，對于普通的切片也少足夠檢測 100 個樣品,，使用 6 孔板測定，足夠測定 100 個樣品,。

自備材料：
PBS 或 HBSS ,、細胞培養(yǎng)器皿 、顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：
(一) 貼壁細胞染色：
1、 對于 6 孔板中培養(yǎng)的細胞,，吸除細胞培養(yǎng)液,，用 PBS 或 HBSS 洗滌 1 次，加入 1ml β-半乳糖苷酶染色固定液,，室溫固定 15min。對于其它類型的培養(yǎng)板,，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進行操作,。
2,、 吸除細胞固定液,，用 PBS 或 HBSS 洗滌細胞 3 次,，每次 3min,。
3,、 吸除 PBS 或 HBSS，每孔加入 1ml 染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器,，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器配制染色工作液。

染色工作液的配制方法參考表 1,。
表 1：染色工作液的配制方法:
β-半乳糖苷酶染色液 A 10μl
β-半乳糖苷酶染色液 B 10μl
β-半乳糖苷酶染色液 C 930μl
X-Gal 溶液 50μl

說明：對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌,；而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌,，一旦高溫高壓處理就會嚴(yán)重變形,。
4、 37℃孵育過夜,，可以用 parafilm 或保鮮膜封住 6 孔板防止蒸發(fā),。
注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行。
5,、 普通光學(xué)顯微鏡下觀察,。如不能及時觀察計數(shù)，可以去除染色工作液,，加入 2ml PBS,，4℃可以保存數(shù)天；或者加上封片液封片后,，4℃可以保存較長時間,。
(二) 懸浮細胞染色：
1、 離心收集細胞 1.5ml 離心管內(nèi),，用 PBS 或 HBSS 洗滌 1 次,，加入 1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15min,。固定時可以在搖床上緩慢搖動,，以避免細胞結(jié)成團塊。
2,、 離心,，吸除細胞固定液，用 PBS 或 HBSS 洗滌細胞 3 次,，每次 3min,。
3、 離心,，吸除 PBS 或 HBSS,，每管加入 0.5-1ml 染色工作液。
染色工作液的配制方法參考表 1,。
4,、 37℃孵育過夜。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行,。
5,、 取部分染色后的細胞，滴加到載玻片上或 6 孔板內(nèi),，普通光學(xué)顯微鏡下觀察,。如不能及時觀察計數(shù)，可以離心,，去除染色工作液,，然后加入 1ml PBS,，4℃可以保存數(shù)天。如果離心,，取細胞用于涂片,，加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間,。
(三) 組織切片染色：
1、 對于石蠟切片先按照常規(guī)方法進行脫蠟和水化處理,。對于冷凍切片直接按照以下步驟進行,。
2、 加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液,，以充分蓋住組織為宜,，室溫固定不少于 15min。
3,、 用 PBS 浸泡洗滌組織 3 次,，每次不少于 5min。
4,、 吸除 PBS,，加入適當(dāng)量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表 1,。
5,、37℃孵育過夜，可以用 parafilm 或保鮮膜封住防止蒸發(fā),。把整個切片浸泡在染色工作液中,。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行。
5,、 普通光學(xué)顯微鏡下觀察,。如不能及時觀察，加上封片液封片后 4℃可以保存較長時間,。

注意事項：
1,、 β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意防護,。
2,、 β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的 pH 條件，不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行染色反應(yīng),。用于細胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的 pH 值,，而導(dǎo)致染色失敗。
3,、 β-半乳糖苷酶染色液 B 在剛剛?cè)芙夂髸^察到有沉淀,，屬正?，F(xiàn)象，充分混勻或 Vortex 后,，沉淀會全部溶解,。作為常規(guī)，試劑使用前必須確保沉淀全部溶解,，并且混勻,。
4、 配制染色工作液時需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,，不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器,。但染色時可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進行，例如普通的 6 孔板就可以用作染色的容器,。
5,、 需自備 PBS 或 HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
6,、 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關(guān)文獻：

《Exosomes from hyperglycemia-stimulated vascular endothelial cells contain versican that regulate calcification/senescence in vascular smooth muscle cells》 作者:Shuang Li, Jun-Kun Zhan, Yan-Jiao Wang, Xiao Lin, Jia-Yu Zhong, Yi Wang, Pan Tan, Jie-Yu He, Xing-Jun Cui, Yi-Yin Chen, Wu Huang and You-Shuo Liu 期刊:Cell & Bioscience 影響因子:3.355 PMID:30622695

β-半乳糖苷酶染色試劑盒