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土壤酸性轉(zhuǎn)化酶（S-AI）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作,。
貨號：BC3070
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1瓶加入15 mL試劑一充分溶解備用,，用不完的試劑2-8℃保存2周；

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg無水葡*糖,。臨用前加入1 mL試劑一充分溶解,，制備10 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液待用，2-8℃保存兩周,。

產(chǎn)品說明：
S-AI在pH為4.5~5.0（酸性）條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,，是土壤微生物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一,。S-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),，生成棕紅色氨基化合物,，在540nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)540nm光吸收增加速率與S- AI活性成正比,。




注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計,、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋,、臺式離心機、可調(diào)式移液器,、1mL玻璃比色皿,、研缽、冰,、蒸餾水,、30-50目篩、甲苯（不允許快遞）,。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可參考文獻）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干,，過30~50目篩,。
二、測定步驟

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至540nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將10mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋至0.2,、0.15,、0.1、0.08,、0.06mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋表

備注：試驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需標(biāo)準(zhǔn)品800µL。

1. 樣本測定：

混勻,，煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分流失）,，流水冷卻后,，540nm處蒸餾水調(diào)零，記錄各管吸光值A,，記為A測定管,、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管,、A空白管,。計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管,。每個測定管需設(shè)一個對照管,。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測1-2次。
三,、S-AI活性計算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)）,，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,，將ΔA測定（y,，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）,。

1. S-AI活性計算

單位定義：37℃每g土壤每天產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位,。
S-AI（U/g 土樣）=x×V÷W÷T=19.2×x÷W
V：加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.8mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；T：反應(yīng)時間：1/24d,。
注意事項：
1,、如果加入試劑三，煮沸10min后有混濁物出現(xiàn),，建議離心除去沉淀（10000rpm,，2min），取上清測定吸光度,；
2,、如果吸光值大于1，可以將上清液再進行稀釋,；若吸光值較小,，可以減少上清液稀釋倍數(shù),。兩種操作均要注意改變公式中的稀釋倍數(shù)。
實驗實例：

1. 取兩管0.1g林土,，即為測定管和對照管,，按照測定步驟操作，記為A測定管,、A對照管,。計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.425-0.054=0.371，標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=6.0331x-0.3103,，x=0.113,，計算酶活得：S-AI（U/g 土樣）=19.2×x÷W=19.2×0.113÷0.1=21.696 U/g 土樣。

2. 取兩管0.1g林土,，即為測定管和對照管,，按照測定步驟操作，記為A測定管,、A對照管,。計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.410-0.055=0.355，標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=6.0331x-0.3103,，x=0.110,，計算酶活得：

S-AI（U/g 土樣）=19.2×x÷W=19.2×0.110÷0.1=21.12 U/g 土樣。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC4040/BC4045  土壤中性轉(zhuǎn)化酶（S-NI）活性檢測試劑盒
BC0240/BC0245  土壤蔗糖酶（S-SC）活性檢測試劑盒

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