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抗酒石酸酸性磷酸酶染色液

產(chǎn)品說明：
酸性磷酸酶(acid phosphatase,，ACP)分布極廣泛,，遍布各種組織,，主要存在于細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，所以常作為溶酶體標(biāo)志酶,。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和胞質(zhì)內(nèi),。各種動物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的適宜 pH 為 4.5～5.5,。存在于正常人肺泡巨噬細(xì)胞和白血病人脾臟的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase,，TRAP)均在細(xì)胞濾泡中，并不是釋放入血液,。血液中的 TRAP 絕大多數(shù)來源于破骨細(xì)胞,，因此可以通過測量血液中的 TRAP 了解破骨細(xì)胞的功能狀態(tài)。

以萘酚 AS-BI 為底物,，在酸性 pH 下被酸性磷酸酶水解釋放出磷酸和萘酚,，萘酚與重氮鹽偶聯(lián)生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中,，若細(xì)胞內(nèi)的 ACP 有抗酒石酸的活性,，則呈陽性反應(yīng)。該染色液可用于新鮮血涂片,、細(xì)胞涂片,，亦可用于冰凍切片、石蠟切片,。
自備材料：
1,、 蒸餾水、恒溫箱
2,、 載玻片,、推玻片
3、 光學(xué)顯微鏡
操作步驟(僅供參考)：
(一)血液,、細(xì)胞涂片：
1,、 推片：取新鮮血液或骨髓涂片置于載坡片上，推玻片于載玻片保持 30 度,，置于血液或細(xì)胞滴液的正前方，稍往后移不血液或細(xì)胞滴液接觸使后者沿推片下緣散開,，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向前滑動鋪滿血膜為止,。
2、 自然晾干,，TRAP 固定液 4℃固定 30s～3min,，多數(shù)情況下 30～60s 即可。
3,、 水洗,，稍微晾干(不易過分干燥),。
4、 切片入 TRAP 孵育液,，置于 37℃溫箱,，避光浸染 45～60min，水洗,。
5,、 復(fù)染：蘇木素染色液染色 5min 或甲基綠染色液染色 2～3min。
6,、 水洗,、晾干、鏡檢,。
(二)冰凍切片：
1,、 冰凍切片回溫 37℃，水中浸泡 1～2min,。
2,、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 1～3min,。
3,、 水洗，稍微晾干(不易過分干燥),。
4,、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃溫箱,，避光浸染 45～60min,，水洗。
5,、 復(fù)染：蘇木素染色液染色 5～8min 或甲基綠染色液染色 2～3min,。
6、 水洗,、晾干,、鏡檢。
(三)石蠟切片：
1,、 石蠟切片脫蠟 5～10min,，重復(fù)一次。
2,、 無水乙醇 5min,，90%乙醇和 70%乙醇各 2min。
3、 水洗 2min,。
4,、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 30s～3min,，多數(shù)情況下 30～60s 即可,。
5、 水洗,，稍微晾干(不易過分干燥),。
6、 切片入 TRAP 孵育液,，置于 37℃溫箱,，浸染 45～60min，水洗,。
7,、 復(fù)染：蘇木素染色液染色 5～8min 或甲基綠染色液染色 2～3min。
8,、 水洗,、晾干、鏡檢,。
染色結(jié)果：
陽性顆粒 紫紅色
細(xì)胞核 藍(lán)色(蘇木素)或綠色(甲基綠)

臨床意義：
1,、 毛細(xì)胞白血病的毛細(xì)胞 ACP 染色呈強(qiáng)陽性或中度陽性，且不被酒石酸抑制,，其他細(xì)胞均呈陰性或極弱陽性,。
2、 急性白血病幼單核細(xì)胞 ACP 染色呈陽性,，原淋巴細(xì)胞呈弱陽性,，原粒細(xì)胞對 ACP 反應(yīng)不一。
3,、 T 淋巴細(xì)胞 ACP 染色呈陽性,，顆粒粗大、分布密集,。B 淋巴細(xì)胞呈陰性或顆粒細(xì)小的弱陽性,。
4、 戈謝細(xì)胞呈強(qiáng)陽性,，尼曼-皮克細(xì)胞呈陰性或弱陽性,。

注意事項(xiàng)：
1、 TRAP 孵育液易失效,，本法宜用皮膚穿刺血涂片，晾干后應(yīng)及時染色
2、 對冰凍切片染色時,，應(yīng)減少切片在室溫暴露的時間,。
3、 樣本需新鮮,，取材后應(yīng)立即處理,，否則會影響酶的活性。
4,、 組織固定需在 4℃冰箱進(jìn)行,，時間不宜超過 24h，否則酶活性會減弱或消失,。
5,、 組織在石蠟包埋時，溫度不宜高于 56℃,。應(yīng)使用熔點(diǎn)為 52～54℃的石蠟進(jìn)行浸蠟,，浸蠟時間要短，否則酶活性會減弱或消失,。
6,、 不純的二甲苯會分解黑色沉淀，宜選用 AR 級以上的二甲苯,。
7,、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液