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人白細胞介素2（IL-2）ELISA試劑盒

注意事項：
1.試劑盒應在有效期內(nèi)使用,，請不要使用過期的試劑。
2.試劑盒未使用時應保存在2-8℃冰箱,，已復溶但未用完的標準品,，請丟棄。
3.試劑盒使用前請在室溫恢復30 min,，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品,。
4.在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持*,。
5.為避免交叉污染,，請在試驗中使用1次性試管,，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器,。.
6.濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶 蓋上，使用前請離心處理（5-10 S即可）,，使管壁上的液體集中在管底部,，取用時，請用移液器小心吹打幾次,。
7.除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8.為保證結(jié)果準確,，每次檢測均需做標準曲線,。

安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護,；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸，請用大量清水清洗,；檢測血液樣本及其它體液樣本時,，請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

自備實驗器材（不提供,，可代購）
1．酶標儀（主波長450nm，參考波長630nm）
2．高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3．洗板機或洗瓶
4．37℃孵育箱
5．雙蒸水,，去離子水,，量筒等
6．稀釋用聚丙烯試管

人白細胞介素2（IL-2）ELISA試劑盒

樣本收集及儲存：
1.細胞培養(yǎng)上清：
將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管，在4℃條件下1000 ×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存）,，避免反復凍融,。
2.血清樣本：
室溫血液自然凝固20 min后，在4℃條件下1000×g離心10 min,，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存）,，保存過程中如有沉淀，請再次離心,，避免反復凍融,。
3.血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標本的實際要求選擇EDTA,，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合20 min，在4℃條件下1000×g離心10 min,，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存）,，避免反復凍融,。

※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,，以免影響檢測結(jié)果,；如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的值，請將樣品做適當倍數(shù)稀釋后檢測,，建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數(shù),。

IL-2 Human ELISA Kit

試劑準備：

1.試劑回溫：先在實驗前30 min將試劑盒，待測樣本放置于室溫下,，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,，請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解,。
2.配制洗滌液：預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,，然后用雙蒸水或去離子水將20倍濃縮洗滌液稀釋成1倍應用液，未用完的濃縮洗滌液放入4℃冰箱保存,。
3.標準品梯度稀釋：加入標準品/樣本稀釋液（SR1）1ml凍干標準品中,，靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為1000pg/ml),，然后按照以下濃度：250、125,、62.5,、31.25、15.62,、7.81,、3.9 pg/ml進行稀釋。復溶過的標準品原液（1000pg/ml）未用完的應廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,，并將其貯存在-20～-80℃冰箱,，具體如下圖。

4.生物素化抗體工作液：預先計算好試驗所需用量,，用檢測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應用工作液（稀釋前充分混勻）,，請在30分鐘內(nèi)加入到反應孔中。

5.酶結(jié)合物工作液：按每次試驗所需用量配制,，用酶結(jié)合物稀釋液（SR3）將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1倍應用工作液（稀釋前離心）,，請在30分鐘內(nèi)使用。

6.洗滌方法：
?自動洗板：甩盡酶標板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干,，注入洗滌液為300ul/孔,注與吸出間隔為30秒，洗板5次,。
?手工洗板：甩盡酶標板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干，用洗瓶加入洗滌液300ul/孔，靜止30秒后甩凈酶標板孔中液體,，在厚迭的吸水紙上拍干,，洗板5次。


結(jié)果判斷：

1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值,。選擇雙波長檢測,，參考波長為 630 nm。如不能進行雙波長檢測,，請用 450 nm 的OD測定值減去630 nm的OD測定值,。
2.計算標準品、樣品的平均OD值：每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值
3.以標準品濃度為橫坐標,，吸光度OD值為縱坐標,，用軟件繪制標準曲線，樣品中IL-2含量可通過對應OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。
4.若標本OD值高于標準曲線上限,，應做適當稀釋后重新檢測，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù),。
 

人白細胞介素2

參數(shù)表征：

1. 數(shù)據(jù)及標準曲線

本圖僅供參考,，應以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算人IL-2的樣本含量

2. 靈敏度：

低可檢測人IL-2濃度達2pg/ml，20個零標準品濃度OD的平均值加上兩個標準差,，計算相應的可檢測濃度,。

3. 特異性：

不與人IL-2、4,、6,、8、10反應,，小鼠IL-2,、4、6,、8等反應。

4. 重復性：

板內(nèi),，板間變異系數(shù)<10%,。

 5. 回收率：

在選取的健康人血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的人 IL-2,，計算回收率,。

6. 線性稀釋：

分別在選取的4 份健康人血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度人 IL-2，在標準曲線動力學范圍內(nèi)進行稀釋,，評估線性,。

人白細胞介素2 ELISA KIT常見問題及解決方法：