土壤FDA水解酶活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動,，請注意并嚴格按照該說明書操作,。

貨號：BC0480

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1,、 試劑二：臨用前取1支加1.5 mL丙酮溶解，用不完的-20℃分裝保存一周,，避免反復(fù)凍融,；

2、 標準品：10 mg熒光素,，臨用前加入3.03 mL 50%丙酮（丙酮（V）：蒸餾水（V）=1:1）配成10 μmol/mL的熒光素標準溶液,，可45℃水浴促進溶解,，-20℃分裝保存兩周，避免反復(fù)凍融,。

產(chǎn)品說明：

FDA水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機質(zhì)的轉(zhuǎn)化,，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標之一。

FDA是一種無色化合物,，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解,，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素,，穩(wěn)定不易被分解,，并在490nm處有強吸收峰,，通過檢測490nm處的吸光值變化可計算得FDA水解酶活性,。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計,、1mL玻璃比色皿、天平,、臺式離心機,、恒溫水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、丙酮（不可快遞）,、研缽,、30-50目篩。

三,、FDA水解酶活性計算

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位,。

FDA活性（U/g 土樣）=（ΔA測定÷ΔA標準×C標準品）×V反總÷W ÷T=48×（ΔA測定÷ΔA標準）÷W

C標準品：標準品濃度 2μmol/mL；V反總：反應(yīng)總體積,，1mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；T：反應(yīng)時間,，1h=1/24d。

注意事項：

1. 盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣本,，否則很難準確反映酶的活性,。

2. 測定之前進行預(yù)實驗，若吸光值大于1.2,，可適當減少土樣質(zhì)量再測定,。若吸光值過小，可增加土樣質(zhì)量或增加反應(yīng)時間來進行測定,。

實驗實例：

1,、 分別取兩管0.1g三葉草土于1.5mLEP管中,，分別為對照管及測定管，按照測定步驟操作,，取上清稀釋5倍進行測定,，用1mL玻璃比色皿測定吸光值，計算ΔA測定=A測定-A對照=1.148-0.066=1.082,，ΔA標準=A標準-A空白=0.499-0=0.499,，按土壤質(zhì)量計算酶活得：

FDA活性（U/g 土樣）=48×（ΔA測定÷ΔA標準）÷W×5（稀釋倍數(shù)）= 5204.01 U/g 土樣。

2,、 分別取兩管0.1g林土于1.5mLEP管中,，分別為對照管及測定管，按照測定步驟操作,，取上清稀釋5倍進行測定,，用1mL玻璃比色皿測定吸光值，計算ΔA測定= A測定-A對照=0.973-0.133=0.84,，ΔA標準=A標準-A空白=0.499-0=0.499,，按土壤質(zhì)量計算酶活得：

FDA活性（U/g 土樣）=48×（ΔA測定÷ΔA標準）÷W×5（稀釋倍數(shù)）= 4040.08 U/g 土樣。

參考文獻：

[1] Sánchez-Monedero M A, Mondini C, Cayuela M L, et al. Fluorescein diacetate hydrolysis, respiration and microbial biomass in freshly amended soils[J]. Biology and Fertility of Soils, 2008, 44(6): 885-890.

[2] Paudel B R, Udawatta R P, Anderson S H. Agroforestry and grass buffer effects on soil quality parameters for grazed pasture and row-crop systems[J]. Applied Soil Ecology, 2011, 48(2): 125-132.

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