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乙醇酸氧化酶（GO）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC2015
規(guī)格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入2.5 mL雙蒸水溶解,，用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融。

產品說明：
乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是乙醇酸循環(huán)中的一種酶,，也是植物光呼吸代謝中的關鍵酶,，催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，通過測定乙醇酸氧化酶活性,，可以了解植物光合和呼吸代謝的基本方法,。
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和鹽酸苯 肼反應生成乙醛酸苯腙,，在324nm有特征吸收峰,。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀,、低溫離心機、可調式移液槍,、微量石英比色皿/96孔板UV板,、天平、研缽/勻漿器,、冰和蒸餾水,。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）
組織：按照組織質量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿,，然后10000g，4℃,，離心10min,，取上清置冰上待測。
細胞或細菌：按照細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時間3min）,；然后10000g，4℃,，離心10min,，取上清置于冰上待測。
二,、測定步驟

1. 紫外分光光度計/酶標儀預熱30min 以上,，調節(jié)波長至324nm，紫外分光光度計蒸餾水調零,。

2. 將試劑一25℃預熱15min,。

3. 樣本測定：在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑：

注意事項：

1. 測定之前進行預實驗,，若吸光值A1>1，請將樣本用提取液進行適當的稀釋再測定,，并在計算公式中乘以稀釋倍數,。

2. 色素含量較高的樣本，可在提取酶時加活性炭吸附,。

3. 空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔,，正常情況下，其OD值變化不超過0.02,。

實驗實例：

1. 稱取約0.1g三葉草組織,，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿,，然后10000g,，4℃，離心10min，取上清進行檢測,，使用微量石英比色皿測得ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.8956-0.7839=0.1117,，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.1117-0.0083=0.1034,，按樣本質量計算酶活得：GO酶活（U/g 質量）=392.16×ΔA÷W=405.4934 U/g 質量,。

2. 稱取約0.1g菠菜組織，加入1mL提取液,，進行冰浴勻漿,，然后10000g，4℃,，離心10min,，取上清稀釋2倍進行檢測，使用微量石英比色皿測得ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.9286-0.8105=0.1181,，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083,，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.1181-0.0083=0.1098,，按樣本質量計算酶活得：GO酶活（U/g 質量）=392.16×ΔA÷W×2（稀釋倍數）=861.1834 U/g 質量,。

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